客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

產(chǎn)品名稱：Cy5

規(guī)格：5 mg/25 mg/50 mg

貨號：BJP1122

分類：熒光核酸試劑

產(chǎn)品僅用于科研儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

染料法

探針法　

可進行相對，定量表達分析，定性分析，SNP檢測等

實驗報告

·電泳圖   ·標準曲線 

·溶解曲線 ·擴增曲線

·完整的實驗過程、試劑、儀器及分析報告

儲存條件：

14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

探針法：

aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴增相關(guān)。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時，熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應(yīng)時，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切，使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。

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檢測步驟：

一、 試劑的準備

從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。

設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量

熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL

酶混合物 1 µL N×1 µL

總量 15 µL N×15µL

（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。

7.2 qPCR反應(yīng)條件

將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。

推薦循環(huán)條件:

1循環(huán) 50℃ for 2 min

預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min

PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec

60℃ for 60 sec

在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

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Cy5 Saccharomyces│cerevisiae斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 啤酒生產(chǎn)菌。培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法

Sorangium│cellulosum分離基物: 土壤凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 作為粘細菌聚酮合酶的的基因篩選庫，分析和篩選聚酮基因的多樣性培養(yǎng)基: 844生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Saccharomyces│sp.斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 312生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法

Bacillus│subtilis分離基物: 污泥凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)淀粉酶培養(yǎng)基: 33生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

分枝桿菌種屬: Mycobacterium│Mycobacterium parmense凍干物安全等級: 3模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究存儲條件: 真空冷凍干燥法

Lactobacillus│分離基物: 健康孕婦分泌物凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0006生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法

Escherichia│coli分離基物: 病料凍干物安全等級: 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究培養(yǎng)基: 335生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法;

Saccharomyces│cerevisiae斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 以糖蜜為原料發(fā)酵生產(chǎn)酒精。培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲條件: 定期移植法

龜分支桿菌龜型亞種種屬: Mycobacterium│Mycobacterium chelonae subsp chelonae凍干物安全等級: 3模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法
操作程序：

由您提供該實驗中目的基因的相關(guān)資料（如：基因名稱、序列等信息），我們共同探討服務(wù)的可能性和技術(shù)路線；

商定服務(wù)收費、付款方式、服務(wù)期限等，并簽定技術(shù)服務(wù)合同。

有您提供實驗所需的足夠量的實驗樣本（100mg組織或107個細胞），本公司不接受您提供的RNA樣本

PCR所需引物/探針（如果用探針法），可以由您自己提供，也可以委托本公司設(shè)計合成（費用另計）。如果由您自己提供，必須是PAGE純化的高質(zhì)量的干粉，本公司不接受已溶解的引物/探針。

我們進行RNA抽提、RNA定量、反轉(zhuǎn)錄、Real-time PCR擴增、數(shù)據(jù)分析。

產(chǎn)品僅用于科研提供實驗報告，包括實驗過程、所用儀器試劑、擴增曲線、標準曲線和相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。