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測定意義

查爾酮異構酶(Chalcone isomerase, CHI)是第一個被認識的黃酮類化合物合成相關酶，也是黃酮代謝途徑中的關鍵酶之一。查爾酮異構酶和查爾酮合酶一起構成了黃酮類化合物生物合成的限速酶。

測定原理：

查爾酮異構酶（CHI）催化查爾酮環(huán)化形成 4,5,7-三羥基黃烷酮，通過測定381nm下的吸光度變化表示CHI的活性。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

實驗方法學：

選擇抗凝的注意點：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

總銀杏酸(C13:0,C15:1,C17:2,C15:0,C17:1) ≥90%3-溴-2-基吡 98%Anti-OAT-3  陰離子轉運蛋白-3抗體

6-氯-1-己 95%3-氯基異酸酯  96%Anti-OAT4L/URAT1  尿酸鹽重吸收轉運子1抗體

辛二 99%鄰氯苯異酸酯 98%Anti-Ghrelin/GHRP  生長釋放肽抗體

辛二酸 99%間氯苯異酸酯 98%anti-OCLN/Occludin  緊密連接蛋白抗體

N-氨酰甲基乙磺酸 99%環(huán)己基異酸酯  98%Anti-claudin 5  緊密連接蛋白-5抗體

4--3-肼基-5-巰基-1,2,5-三唑(用于的測定) 99%4-氯-2-吡甲酸 98%Anti-OCT1  陽離子轉運器1抗體

瓊脂糖 for biochemistry 4-氯吡-2-甲酸甲酯 98%Anti-OCT2  陽離子轉運蛋白2抗體

3--9-乙基咔唑  95%5-氯噻吩-2-磺酰 97%Anti-Oct-4(Octamer-4)  胚胎干關鍵蛋白抗體

查爾酮異構酶（CHI）微量法檢測試劑盒5--1.3.3--2-亞啉 98%f- BetaCG ELISA Kit  大鼠游離β絨毛膜促性豚鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

鄰氧 CP,97%ALD ELISA Kit  大鼠固酮豚鼠甘露糖受體C1樣蛋白1(MRC1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

鄰氧 GR,99%NA ELISA Kit  大鼠去素豚鼠Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

鄰氧 分析標準品，99.5%,用于環(huán)境分析PGF ELISA Kit  大鼠前列腺素F豚鼠腺苷環(huán)化3(ADCY3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

3-氧 98%PGE1 ELISA Kit  大鼠前列腺素E1豚鼠載脂蛋白C1(ApoC1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

4,4'-二聯(lián)  >98%（GC）CORT ELISA Kit  大鼠皮質酮/酮豚鼠膽囊收縮素/腸促胰肽A受體(CCKAR)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

2-乙氧 98%ET-1 ELISA Kit  大鼠內皮素1豚鼠膠原II(Collagenase II)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

對乙氧 98%BK ELISA Kit  大鼠血管舒緩激肽豚鼠脂肪分化相關蛋白(ADRP)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

N-乙-N-芐 98%Resistin ELISA Kit  大鼠抵抗素豚鼠封閉蛋白11(CLDN11)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

N,N-二 standard for GC, ≥99.5% (GC)PRL ELISA Kit  大鼠催素豚鼠Ⅰ型膠原α1(COL1α1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

N,N-二 AR,99%GRH ELISA Kit  大鼠促生長激素釋放激素豚鼠通用轉錄因子II A肽1(GTF2A1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

N,N-二 CP,98%ACTH ELISA Kit  大鼠促皮質激素豚鼠轉錄激活因子-1(ATF-1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

N,N-二 purified by redistillation, ≥99.5%FSH ELISA Kit  大鼠促卵泡素豚鼠β4(TMSβ4)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

N，N-二乙 ARER ELISA Kit  大鼠雌二受體豚鼠前列腺素D2合成(PGD2S)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

N，N-二乙 ≥99% (GC)Pro-ANP ELISA Kit  大鼠前心鈉肽豚鼠β肌動蛋白(β-actin)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。