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測(cè)定意義

S-NR催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，是土壤硝態(tài)氮還原的關(guān)鍵酶。研究S-NR的活性對(duì)合理施肥，降低氮素的損失具有重要意義。

測(cè)定原理

S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋ +H 2 O；產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下，與對(duì)–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物；生成的紅色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰，可用分光光度法測(cè)定。

需自備的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白a1抗體Human RHOB ELISA Kit槐米

白介素28受體抗體Human RHEB ELISA Kit寬葉纈草

KB抑制蛋白激Ζ抗體Human RGS1(Regulator of G-protein signaling 1) ELISA Kit

胰島素基因增強(qiáng)結(jié)合蛋白1抗體Human RFXAP ELISA Kit硝基呋喃酰（呋喃丙雜質(zhì)A）

整合素β1結(jié)合蛋白2抗體Human RGMA ELISA Kit

線粒體翻譯起始因子3抗體Human RGS11 ELISA Kit小鼠骨橋素(OPN)Elisa測(cè)定試劑盒

白介素27β抗體Human RFC3 ELISA Kit小鼠催乳素(PRL)Elisa測(cè)定試劑盒

胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體抗體Human RGR ELISA Kit雞B因子(BF)Elisa測(cè)定試劑盒

土壤硝酸還原酶（SNR）微量法檢測(cè)試劑盒胎兒纖連蛋白(fFN)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

小鼠肌醇3激(PI3K)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

柯薩奇病毒IgA(Cox V-IgA)免疫試劑盒*直銷(xiāo)

小鼠白介素12(IL-12/P40)免疫試劑盒*直銷(xiāo)

小鼠一氧化碳血紅蛋白(HbCO)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

豬Ⅱ(FⅡ)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

5羥色胺/血清素/血清胺(5HT/ST)抗體(IgA)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

魚(yú)白介素4(IL-4)免疫試劑盒*直銷(xiāo)

大鼠可溶性CD40配體(sCD40L)免疫試劑盒*直銷(xiāo)

大鼠胃泌素(Gastrin)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。