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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

shēng huà shì jì 克氏z

shēng huà shì jì AC肉湯 容量： 5克

shēng huà shì jì ABTS液體底物 容量： 100毫克

shēng huà shì jì ABTS底物片劑 容量： 1克

shēng huà shì jì A1培養(yǎng)基 容量： 1米

shēng huà shì jì 9-芴酮 容量： 保存：-20℃ 50毫克

shēng huà shì jì 9-芴甲醇 容量： 保存：-20℃ 50毫克

shēng huà shì jì 96孔血凝板 容量： 保存-20℃ 25U

shēng huà shì jì 96孔細胞培養(yǎng)板 容量： 5毫克 

shēng huà shì jì 96孔單條可拆酶標板 容量： 5毫克

shēng huà shì jì 96孔不可拆酶標板 容量： 保存：-20℃ 1毫克 

shēng huà shì jì 90mm培養(yǎng)皿 容量： 100克

shēng huà shì jì 8-羥基喹哪啶 容量： RT 25克

Y187 感受態(tài)細胞 100ul*50 shēng huà shì jì 8-羥基喹啉銅鹽 容量： 500克

shēng huà shì jì 8-羥基喹啉硫酸鹽 容量： RT 100克

shēng huà shì jì 8-羥基喹啉 容量： RT 250毫升

shēng huà shì jì 8-氮* 容量： 2～8℃ 1克

shēng huà shì jì 7-羥基-4-甲基香 容量： 100克

shēng huà shì jì 7-氨基-4-甲基素 容量： 100KU

shēng huà shì jì 767活性炭 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 75mm培養(yǎng)皿 容量： 25克

shēng huà shì jì 75cm2正方斜口細胞培養(yǎng)瓶 容量： 100克

shēng huà shì jì 75cm2三角斜口細胞培養(yǎng)瓶 容量： 25克

shēng huà shì jì 732陽離子交換樹脂 容量： 保存-20℃ 1.5KU

shēng huà shì jì 719陰離子交換樹脂 容量： 1KU

shēng huà shì jì 717陰離子交換樹脂 容量： 2～8℃ 250U

shēng huà shì jì 7.5%純度氯肉湯 容量： 2～8℃ 100毫升

shēng huà shì jì 7.0ml離心管 容量： 2～8℃ 25KU

shēng huà shì jì 6-硝基苯并咪唑 容量： RT，避光 1克

shēng huà shì jì 6-巰基嘌呤一水合物 容量： 2～8℃ 10克

shēng huà shì jì 6-羥基多巴胺 容量： 保存：-20℃ 1毫克

shēng huà shì jì 6-氯嘌呤 容量： 100克

shēng huà shì jì 6-磷酸葡萄糖鋇鹽 容量： 5克

shēng huà shì jì 6孔細胞培養(yǎng)板 容量： 25克

shēng huà shì jì 6-糠氨基嘌呤 容量： 25克

shēng huà shì jì 6-甲基素 容量： 25克

shēng huà shì jì 6-氮雜* 容量： RT，避光 25克

shēng huà shì jì 6-芐氨基嘌呤 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 6-氨基正己酸 容量： 100毫克

shēng huà shì jì 60%/L鈉蛋白胨肉湯 容量： RT 50克

shēng huà shì jì 5-溴* 容量： 100克

shēng huà shì jì 5-溴尿苷 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 5-溴代水楊酸 容量： 100克

shēng huà shì jì 5-溴-6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷 容量： RT

注意事項:

1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。