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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

 PP 裸鼠蛋白磷酸酶 規(guī)格： 48T/96T

 MrNV 羅氏沼蝦諾達病毒 規(guī)格： 48T/96T

 MHC 鹿主要組織相容性復合體 規(guī)格： 48T/96T

 IGFBP-3 鹿胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3 規(guī)格： 48T/96T

 SAA 鹿血清淀粉樣蛋白A 規(guī)格： 48T/96T

 eNOS 鹿內(nèi)皮型一氧化氮合成酶 規(guī)格： 48T/96T

 EMP 鹿紅細胞膜蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 VTG 鯉魚卵黃蛋白原 規(guī)格： 48T/96T

Ar A4 電擊感受態(tài)細胞 50ul*10 VTG 鯉魚卵黃蛋白原 規(guī)格： 48T/96T

 UEA 荊豆凝集素 規(guī)格： 48T/96T

 LT 家蠶卵黃蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 TGF-β1 雞轉(zhuǎn)化生長因子β1 規(guī)格： 48T/96T

 MHC/B 雞主要組織相容性復合體 規(guī)格： 48T/96T

 TRAIL-R3 雞腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體3 規(guī)格： 48T/96T

 TNF-α 雞腫瘤壞死因子α 規(guī)格： 48T/96T

 LPS 雞脂多糖/內(nèi)毒素 規(guī)格： 48T/96T

 ACAC 雞乙酰乙酸檢測 規(guī)格： 48T/96T

 IGF-1 雞胰島素樣生長因子1 規(guī)格： 48T/96T

 NADPH 雞*腺嘌呤二核苷酸磷酸 規(guī)格： 48T/96T

 PF-4/CXCL4 雞血小板因子4 規(guī)格： 48T/96T

 NO 雞血清一氧化氮 規(guī)格： 48T/96T

 VEGF 雞血管內(nèi)皮細胞生長因子 規(guī)格： 48T/96T

注意事項:

1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。