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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

uà shì jì 輔羧酶 容量： 1公斤

shēng huà shì jì * 容量： RT 10克

shēng huà shì jì 福氏*佐劑 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 福氏不*佐劑 容量： RT 250克

shēng huà shì jì 福林酚 容量： 2～8℃ 25毫克

shēng huà shì jì 氟鈦酸鉀 容量： RT 250克

shēng huà shì jì 氟鈦酸銨 容量： 5克

shēng huà shì jì 氟硼酸鈉 容量： 10克

shēng huà shì jì 氟硼酸鉀 容量： RT 500毫升

shēng huà shì jì 氟硼酸銨 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 氟鋁酸鈉 容量： 2～8℃ 1克

shēng huà shì jì 氟鋁酸鉀 容量： 25克

shēng huà shì jì 氟鋁酸銨 容量： 5克

stable 電擊感受態(tài)細胞 50ul*5shēng huà shì jì 氟化鈰 容量： RT 10克

shēng huà shì jì *銨 容量： 500克

shēng huà shì jì 氟化釹 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 氟化鎳 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 氟化鈉 容量： 100克

shēng huà shì jì 氟化鎂 容量： 100克

shēng huà shì jì 氟化鉀 容量： RT 100克

shēng huà shì jì 氟化鈣 容量： RT 100克

shēng huà shì jì 氟化銨 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 氟硅酸 容量： RT 25克

shēng huà shì jì * 容量： 25克

shēng huà shì jì 孵育盒

 BCR 人B細胞受體 規(guī)格： 48T/96T

 BCGF 人B細胞生長因子 規(guī)格： 48T/96T

 Bcl-2 人B細胞淋巴瘤因子2 規(guī)格： 48T/96T

 BLNK 人B細胞連接蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 BAFF-R 人B細胞活化因子受體 規(guī)格： 48T/96T

 BCDF 人B細胞分化因子 規(guī)格： 48T/96T

 BLC-1/CXCL13 人B-淋巴細胞趨化因子1 規(guī)格： 48T/96T

 Bid 人BH3結構域凋亡誘導蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 BAX 人Bcl-2相關X蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 ASP 人A組鏈球菌菌壁多糖抗體 規(guī)格： 48T/96T

 AP12 人apelin 12 規(guī)格： 48T/96T

 AGRP 人Agouti相關蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 AGRP 人Agouti相關蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 8-iso-PG 人8異前列腺素 規(guī)格： 48T/96T

 8-epi-PGF2α 人8-異構前列腺素F2α 規(guī)格： 48T/96T

 8-OHdG 人8羥基脫氧鳥苷 規(guī)格： 48T/96T

 6-keto-PGF1a 人6酮前列腺素F1a 規(guī)格： 48T/96T

 6-K-PG 人6酮前列腺素 規(guī)格： 48T/96T

 6-OHDA 人6-羥多巴胺 規(guī)格： 48T/96T

 5-LO/LOX 人5脂加氧酶 規(guī)格： 48T/96T

 5-HT 人5羥色胺 規(guī)格： 48T/96T

 5-HIAA 人5羥基吲哚乙酸 規(guī)格： 48T/96T

 5-NT 人5核苷酸酶 規(guī)格： 48T/96T

 Col Ⅳ 人Ⅳ型膠原 規(guī)格： 48T/96T

容量： 12毫升

注意事項:
1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。