微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定方法！

微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定方法！

微生物體積很小，測(cè)定個(gè)體生長(zhǎng)很困難，也沒有太大意義。通常微生物的生長(zhǎng)是指群體的生長(zhǎng)，微生物生長(zhǎng)量是指在一定條件下微生物經(jīng)過培養(yǎng)后群體的生長(zhǎng)量。

測(cè)定生長(zhǎng)量的方法有許多種，可以直接測(cè)量培養(yǎng)物的體積或質(zhì)量，也可以通過測(cè)量細(xì)胞組分含量或濁度等指標(biāo)來間接獲得微生物的量。

一、直接法

⒈測(cè)體積

它是一種較為粗放的方法，通常用于初步的測(cè)定。

操作方法如下：將待測(cè)培養(yǎng)液放在刻度離心管中作自然沉降或進(jìn)行一定時(shí)間的離心，然后觀察沉降物的體積。

⒉稱干重

采用離心法或過濾法測(cè)定，一般干重為濕重的10%-20%,一個(gè)細(xì)菌一般重10-12

~10-13g。

⑴離心法：將待測(cè)培養(yǎng)液離心，再用清水洗滌離心1~5次后干燥，可用105℃、100℃或紅外線烘干，也可在較低的溫度(-80℃或-40℃)下進(jìn)行真空干燥，然后稱干重。

⑵過濾法：如為絲狀真菌可用濾紙過濾，如為細(xì)菌可用乙酸纖維膜等濾膜進(jìn)行過濾。過濾后，細(xì)胞可用少量水洗滌，再真空干燥(-40℃以下),稱干重。一般在液體培養(yǎng)基中，細(xì)菌的濃度的數(shù)量級(jí)大約為108CFU/mL, 100 mL培養(yǎng)物可獲得10 mg ~300 mg干重的細(xì)菌。

二、間接法

⒈代謝指標(biāo)法

微生物生長(zhǎng)過程中伴隨著的物質(zhì)合成與利用，因此很多代謝指標(biāo)與細(xì)菌生長(zhǎng)量相關(guān)，這些指標(biāo)可用作生長(zhǎng)測(cè)定的相對(duì)值。

大多數(shù)細(xì)菌的含氮量約為干重的12.5% ,酵母菌約為7.5% ,霉菌約為6.0%.總氮在細(xì)胞粗蛋白中的含量也較為穩(wěn)定。因此，培養(yǎng)物含氮量可以近似反應(yīng)生長(zhǎng)量。含氮量的測(cè)定方法有很多，常用凱氏定氮法。此法適用于細(xì)胞濃度較高的樣品，操作過程較繁鎖。

微生物新陳代謝過程中離不開碳元素。測(cè)定培養(yǎng)物含碳量的方法如下：將培養(yǎng)物混入1ml水或無機(jī)緩沖液中，用2 mL2%重鉻酸鉀溶液在100 ℃下加熱30 min,冷卻后，加水稀釋至5 mL,在580 nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值(用試劑作空白對(duì)照，并用標(biāo)準(zhǔn)樣品作標(biāo)準(zhǔn)曲線),即可推算出生長(zhǎng)量。

微生物細(xì)胞內(nèi)的其他成分，如磷、DNA、RNA、ATP和N-乙酰胞壁酸等的含量，以及產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)二氧化碳(用標(biāo)記葡萄糖作基質(zhì))、耗氧、黏度和產(chǎn)熱等指標(biāo)，也都可以用于生長(zhǎng)量的測(cè)定。

⒉比濁法

微生物在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，由于個(gè)體體積和細(xì)胞數(shù)量的增加，引起培養(yǎng)物混濁度的增高。通過測(cè)定培養(yǎng)物的濁度可以近似推斷其生長(zhǎng)量。

比濁法通常采用McFarland比濁管，用不同濃度的氯化鋇與稀硫酸配制成的10支試管，其中形成的有10個(gè)濃度梯度，分別對(duì)應(yīng)10個(gè)相對(duì)的細(xì)菌濃度(預(yù)先用相應(yīng)的細(xì)菌測(cè)定)。某一未知濃度的菌液在透射光下用肉眼與某一比濁管進(jìn)行比較，如果兩者的濁度相當(dāng)，即可目測(cè)出該菌液的大致濃度。如要精確測(cè)定培養(yǎng)物的濁度，則需要用分光光度計(jì)進(jìn)行。在可見光的450 nm -650 nm波長(zhǎng)內(nèi)均可測(cè)定。

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