沉降菌監(jiān)測的操作方法與注意事項！

沉降菌監(jiān)測的操作方法與注意事項！

一、方法

《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法》（GB/T16294-2010）

沉降法：通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿中，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下使其繁殖到可見菌落并進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。

二、沉降皿

沉降皿：直徑90mm*15mm

培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊脂（TSA）

       沙氏瓊脂（SDA）

培養(yǎng)條件：同浮游菌監(jiān)測

培養(yǎng)基質(zhì)量：

 應(yīng)符合2015年版《中國藥典》中“（1921）藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則”的相關(guān)要求。

1）培養(yǎng)基制備要求

2）培養(yǎng)基貯藏要求

3）培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗

用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護，要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進行的預(yù)培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

關(guān)鍵問題：暴露蒸發(fā)失水，會降低培養(yǎng)基的某些微生物的生長。

單向氣流暴露4小時，TSA版失重16%

為了延長暴露和培養(yǎng)基的時間，同時確保平皿仍然提供可靠的結(jié)果，沉降皿可以澆注到一個特定的高澆注線。

包裝：通常是雙重或三重包裝，這取決于潔凈室的級別。外層包裝進入下一個高級別的潔凈室中之后被移除。對于*（ISO5級）潔凈室和隔離器，三層透明包裝時合適的。

隔離器的沉降皿：內(nèi)層的包裝材料必須是*蒸汽不可滲透的，以確保這種常用的消毒劑不會轉(zhuǎn)移的培養(yǎng)基上，采樣后抑制微生物生長，使用為隔離器設(shè)計的培養(yǎng)基。

三、監(jiān)測

1）人員的清潔、消毒和著裝

2）在溫度、濕度、壓力的測試之后進行

3）明確測試狀態(tài)，靜態(tài)測試人員不得多于2人，一般應(yīng)動態(tài)監(jiān)測

4）開啟凈化空調(diào)系統(tǒng)

單向流、靜態(tài)10min以上，非單向流30min以上

5）少采樣點數(shù)

注：*（單向流）面積指送風(fēng)口表面積；任何小的潔凈區(qū)采樣點不得少于2個。

6）采樣位置：

離地面0.8-1.5m左右，高于工作面

關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵區(qū)域，可增加采樣點

7）采樣次數(shù)：每個點1次

8）采樣時間：靜態(tài)30分鐘；動態(tài)4小時

單碟暴露時間可以少于4小時，同一位置可使用對個沉降碟連續(xù)進行監(jiān)測并累積計數(shù)。

9）少培養(yǎng)皿數(shù)：

四、注意事項

1）采取一切措施防止采樣污染和其他人為對樣本的污染。

2）采樣注意事項：同懸浮粒子監(jiān)測

3）培養(yǎng)基質(zhì)量

4）陰性對照試驗  每次或每個區(qū)域取1個對照培養(yǎng)皿

5）日常監(jiān)測：*區(qū)及無菌隔離系統(tǒng)采樣點數(shù)目應(yīng)不小于3個且每個采樣點的平皿數(shù)應(yīng)不小于1個。

五、結(jié)果判斷：

每個測點的沉降菌平均濃度必須低于所選定評定標(biāo)準(zhǔn)中的界限。

在靜態(tài)測試時，若某測點的沉降游菌的平均濃度超過評定標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果均合格才能判為符合。

六、限度的理解：*＜1cfu/碟

舉例：監(jiān)測了左中右3個位置，1碟/位置

不合格結(jié)果：3個沉降碟平均菌落數(shù)≥1cfu

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