Zenix-C SEC柱使用說(shuō)明

 色譜柱信息:

 Zenix-C SEC鍵合固定相是采用的表面修飾技術(shù)和3 μm的粒徑，通過(guò)在高純度具有良好機(jī)械穩(wěn)定性的硅膠基質(zhì)上鍵合均勻的納米厚度的親水涂層而制備得到。的化學(xué)修飾技術(shù)可******控制親水涂層的厚度，從而確保柱與柱之間有著******的重現(xiàn)性。由于采用化學(xué)鍵合技術(shù)，且涂層覆蓋******，因此Zenix-C SEC柱具有******的穩(wěn)定性。均勻的表面涂層******了分離的高效性。SEC-100、SEC-150和SEC-300填料為窄粒徑分布的球形顆粒，孔徑分別為100?、150?和300?。3 μm的小粒徑和精心設(shè)計(jì)的大孔體積（Zenix-C SEC-150和300孔體積約為1.35 mL/g，Zenix-C SEC-100孔體積約為1.0 mL/g）使得Zenix 柱具有************的高分離效率和分辨率。Zenix-C SEC柱通過(guò)運(yùn)用的勻漿裝填技術(shù)裝填得到的柱床密度均一穩(wěn)定，獲得很大的柱效。 Zenix-C SEC柱為各種分離應(yīng)用提供優(yōu)良分辨率和很高回收率。應(yīng)用領(lǐng)域覆蓋了大分子量的生物分子（如蛋白質(zhì)、核酸）、小分子量的生物分子（如多肽、寡核苷酸）、天然聚合物（如多糖）、合成聚合物、生物細(xì)胞（如細(xì)菌和病毒）、納米材料（如納米顆粒）等。Zenix-C SEC柱一般在緩沖溶液中進(jìn)行樣品的分離和檢測(cè)。

穩(wěn)定性和性能

Zenix-C SEC柱使用的是被******覆蓋的鍵合硅膠填料，因此具有******的穩(wěn)定性。它與大多數(shù)緩沖液相容，如醋酸銨、磷酸鹽、Tris等。在pH 7.0，流動(dòng)相為150 mM 磷酸鹽緩沖液環(huán)境下，對(duì)Zenix-C SEC柱進(jìn)樣300次或使用1個(gè)月，其分離性能幾乎沒(méi)有發(fā)生改變。

Zenix-C SEC固定相具有中性、親水的特點(diǎn)，與生物分子特別是蛋白質(zhì)之間的非特異性相互作用非常小。Zenix-C SEC柱還具有高容量的特點(diǎn)，因此能******高的分離效率和回收率。圖1是7.8 x 300 mm Zenix-C SEC柱的質(zhì)量控制色譜圖。

圖1. 蛋白混合物在Zenix-C SEC-100、Zenix-C SEC-150和Zenix-C SEC-300柱上的分離色譜圖 

色譜柱: 3 μm, 7.8x300 mm流動(dòng)相: 150 mM Sodium Phosphate Buffer, pH 7流速: 1.0 mL/min檢測(cè)器: UV 214nm進(jìn)樣量: 10 μL樣品: 1) 甲狀腺球蛋白, 670 kD; 2) γ-球蛋白, 158 kD; 3) 卵清蛋白, 44 kD; 4) 肌球蛋白, 16.9 kD; 5) 12, 1355D.

色譜柱特征參數(shù)

硅膠：球形、高純度（金屬含量<10ppm）

粒徑：3 μm

孔徑：

100?, 適用蛋白分子量范圍100 ~ 100,000

150?, 適用蛋白分子量范圍500 ~ 150,000

300?, 適用蛋白分子量范圍5,000 ~1,250,000

安全注意事項(xiàng)

Zenix-C SEC柱通常在中壓下運(yùn)行。如果管路連接不緊，將會(huì)導(dǎo)致有機(jī)溶劑和注入樣品的泄漏，從而對(duì)操作人員的健康產(chǎn)生影響。一旦發(fā)生泄漏，應(yīng)佩戴適當(dāng)?shù)氖痔走M(jìn)行處理。另外當(dāng)打開(kāi)色譜柱時(shí)還應(yīng)采取適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)措施，以防止微小的硅膠顆粒進(jìn)入呼吸道。

色譜柱安裝與操作

色譜柱在運(yùn)輸過(guò)程中或在沒(méi)有使用時(shí)，它的兩端總是用堵頭進(jìn)行密封。當(dāng)將色譜柱接入色譜儀器系統(tǒng)時(shí)，首先移去兩端的堵頭。請(qǐng)注意將流動(dòng)相流動(dòng)的方向與柱上標(biāo)記的方向保持一致。除非出于特殊考慮，例如為了清除堵在色譜柱入口端的臟污等而需要將色譜柱反接以進(jìn)行沖洗時(shí)，建議用戶在接上色譜柱時(shí)一定要遵循柱上標(biāo)記的方向。由于色譜柱的連接是整個(gè)色譜操作過(guò)程的一部分，如果密封卡套過(guò)緊，或安裝不合適，或者密封卡套與色譜柱端口不匹配，都有可能導(dǎo)致溶液的泄漏。請(qǐng)按照下面步驟將色譜柱與密封卡套相連接，從而將色譜柱接入HPLC系統(tǒng)：

（a）******使用的管線，請(qǐng)依次將管線接頭和密封卡套裝在外徑1/16”的管線上。密封卡套的寬口端應(yīng)朝向管線接頭。

（b）將管線緊緊插入色譜柱的接口，向前滑動(dòng)密封卡套和管線接頭，并使管線接頭的螺紋與色譜柱端口的螺紋相互銜接，然后擰緊管線接頭。如果管線為高分子材料，請(qǐng)轉(zhuǎn)到步驟（d）；如果是金屬管線，請(qǐng)繼續(xù)（c）。

（c）在用力將管線壓入柱端接口之后，用1/4”扳手將已擰緊的螺帽再進(jìn)一步緊固。

樣品與流動(dòng)相

為了避免色譜柱的堵塞，所有樣品和溶劑，包括緩沖溶液在內(nèi)，都必須在使用前用0.45 μm或0.2 μm的濾膜過(guò)濾。Zenix-C SEC柱可以使用水或有機(jī)溶劑和水的混合物，如甲醇（或乙腈）的水溶液等作為流動(dòng)相。流動(dòng)相在使用前需要脫氣。一個(gè)簡(jiǎn)單的脫氣方法是將流動(dòng)相在由水泵形成的真空下超聲5 min。

色譜柱的保養(yǎng)

壓力    盡管色譜柱可在高至3500 psi的壓力下使用，但正常的操作壓力應(yīng)當(dāng)?shù)陀?000 psi。長(zhǎng)時(shí)間在高壓下運(yùn)行會(huì)損壞色譜柱。由于壓力來(lái)源于流速，因此流速將受制于系統(tǒng)所能承受的壓力。一般而言，柱壓會(huì)隨著色譜柱使用時(shí)間的增加而逐漸增加。壓力突然增加預(yù)示色譜柱入口端的篩板發(fā)生了堵塞。在這種情況下，建議將色譜柱反接后用適宜的溶劑進(jìn)行沖洗。

溫度     操作溫度為80^oC。為了獲得很長(zhǎng)的使用時(shí)間，操作溫度為10-30^oC。長(zhǎng)時(shí)間在高溫（>80^oC）下操作也會(huì)損壞色譜柱，這種情形在高的pH（>8）條件下特別突出。

流速范圍     內(nèi)徑為4.6 mm和7.8 mm的色譜柱，其正常操作流速分別為0.1-0.4和0.1-1.25 mL/min。

儲(chǔ)藏      長(zhǎng)期不用時(shí)，需要將色譜柱貯存在150 mM磷酸鈉緩沖液（pH 7.0）。中。每根色譜柱在運(yùn)輸過(guò)程中均會(huì)附有兩個(gè)可拆卸的堵頭。為了防止柱床干涸，請(qǐng)用堵頭塞緊色譜柱的兩端。

清洗    多次使用后某些樣品可能會(huì)吸附到入口篩板或填料上。當(dāng)積累至一定程度時(shí)會(huì)出現(xiàn)壓力升高并伴隨峰形展寬的現(xiàn)象。出現(xiàn)這種情況需要清洗色譜柱，一般清洗流程如下：

1. 將色譜柱與檢測(cè)器斷開(kāi)；

2. 將色譜柱反接后進(jìn)行沖洗；

3. 在低于50%推薦流速的條件下沖洗色譜柱。注意柱壓的變化。如果柱壓超出正常水平許多，可降低流速或更換低粘度的緩沖液作為沖洗溶劑；

4. 一般用清洗溶液沖洗10-15倍柱體積即可。更換溶液時(shí)請(qǐng)用3-5倍柱體積的經(jīng)過(guò)蒸餾的去離子水將色譜柱沖洗干凈。

清洗溶液   低pH的鹽溶液有助于移除堿性蛋白。有機(jī)溶劑有助于移除疏水蛋白。助溶劑有助于去除在固定相上強(qiáng)吸附的物質(zhì)（如通過(guò)氫鍵作用等）。應(yīng)注意只有在中性鹽溶液或有機(jī)溶劑沒(méi)有明顯改善效果的情況下使用助溶劑。這里推薦兩種常用的清洗溶液：

1. 具有低pH值的高濃度中性鹽溶液（如0.5 M *溶液，pH 3.0）。

2. 含有機(jī)溶劑（如10-20%的甲醇、乙腈、乙醇等）的緩沖溶液（如50 mM磷酸鹽緩沖液，pH 7.0）。

色譜柱的保護(hù)

除了需要過(guò)濾樣品和流動(dòng)相外，保護(hù)色譜柱的方法是在色譜柱前連接保護(hù)柱或預(yù)柱濾片。預(yù)柱濾片可以去除樣品或流動(dòng)相中的殘留顆粒，或者從HPLC系統(tǒng)，如泵或進(jìn)樣器墊圈上脫離下來(lái)的顆粒。更為有效的方法是使用保護(hù)柱，因?yàn)樗梢猿悠?、流?dòng)相或者來(lái)自于HPLC系統(tǒng)中的具有強(qiáng)吸附能力的樣品組分和殘留顆粒。