?乳酸脫氫酶（LDH）活性微量法測定的原理?是通過檢測LDH催化丙酮酸還原為乳酸的過程中NADH的生成量來間接測定LDH的活性。
具體過程如下：
?反應(yīng)原理?：在LDH的作用下，NAD+被還原生成NADH。NADH與WST-8相互作用產(chǎn)生顏色，從而進行比色測定（λmax=450 nm）?。
?反應(yīng)條件?：LDH將NAD還原為NADH，NADH與WST-8相互作用產(chǎn)生顏色。這個反應(yīng)在冰上避光進行，各組分（如Assay Buffer、Lactate、NAD、WST-8、Enhancer）需在實驗前從冰箱中取出并平衡至室溫，整個過程需避光操作?。
?吸光度測量?：在450 nm波長下測量吸光度，吸光度與LDH活性成正比，可以通過比色法測定LDH的活性?。
?實驗步驟和所需設(shè)備?：
?實驗步驟?：準備工作液（1×Assay Buffer、NAD、WST-8、Enhancer和Lactate混合均勻），將工作液加入96孔板或微量玻璃比色皿中，加入待測樣品，37℃恒溫孵育一定時間后測量吸光度?。
?所需設(shè)備?：酶標儀或可見分光光度計（能測450 nm處的吸光度）、恒溫箱、制冰機、低溫離心機、96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭、去離子水、勻漿器（如果是組織樣本）?。
實驗注意事項?：
?試劑保存?：各組分（如Assay Buffer、Lactate、NAD、WST-8、Enhancer）需在冰上避光保存，避免反復凍融?。
?操作注意事項?：整個實驗過程需在冰上避光進行，避免光照影響結(jié)果?。
