辣椒中辣度檢測ELISA試劑盒
（貨號：Ounuo97002）
辣椒中辣度檢測ELISA試劑盒，采用競爭性酶免檢測技術(shù)用于辣椒及其制品辣度的定量分析，可滿足96次測試，在做復(fù)孔的情況下，一次最多可檢測42個樣本。
產(chǎn)品特性：
? 快速（＜10min）、高回收（≥80%）和高效的前處理方法
? 檢測限1度辣度，定量限2度辣度
? 快速，檢測時間30min
? 高的重現(xiàn)性
原理：
辣椒素ELISA檢測試劑盒, 基于競爭性免疫檢測原理：辣椒素與預(yù)包被在板上的辣椒素蛋白偶聯(lián)物競爭結(jié)合有限的抗辣椒素的抗體，然后加入酶結(jié)合物反應(yīng)，形成酶結(jié)合物—抗辣椒素抗體—辣椒素蛋白偶聯(lián)物復(fù)合物，洗滌除去未結(jié)合的反應(yīng)物，經(jīng)TMB底物顯色產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，加終止液后，產(chǎn)物由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，其在450nm下有吸收峰。樣本中辣椒素含量與樣本的吸光度呈負(fù)相關(guān)。
原理：
辣椒素ELISA檢測試劑盒, 基于競爭性免疫檢測原理：辣椒素與預(yù)包被在板上的辣椒素蛋白偶聯(lián)物競爭結(jié)合有限的抗辣椒素的抗體，然后加入酶結(jié)合物反應(yīng)，形成酶結(jié)合物—抗辣椒素抗體—辣椒素蛋白偶聯(lián)物復(fù)合物，洗滌除去未結(jié)合的反應(yīng)物，經(jīng)TMB底物顯色產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，加終止液后，產(chǎn)物由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，其在450nm下有吸收峰。樣本中辣椒素含量與樣本的吸光度呈負(fù)相關(guān)。
使用前須知：
1. 當(dāng)與儀器方法結(jié)果相比時，試劑盒的結(jié)果偏高這是很正常的現(xiàn)象。因?yàn)閮x器方法僅測量的單一化合物，而試劑盒中的抗體由于不僅能識別目標(biāo)分子且還能識別結(jié)構(gòu)上相似的分子，包括其相關(guān)的代謝產(chǎn)物。因此，使用人員需要明白本產(chǎn)品的局限性和對數(shù)據(jù)做出合理的分析。
2. 任何試劑、檢測程序的改變都可能導(dǎo)致檢測失敗。
3. 不要使用超過有效期的產(chǎn)品；不同批次的產(chǎn)品不得混用。
4. 實(shí)驗(yàn)用水的質(zhì)量很重要，請使用蒸餾水或去離子水。
5. 微孔板開封后，需置于有干燥劑的密封袋中冷藏保存，建議于一個月內(nèi)使用完。
需要但未提供的設(shè)備和試劑：
? 酶標(biāo)儀：配備450nm波長
? 單道移液器：0.5-10、20-200、100-1000μL、0.5-5mL量程各一支
? 多道移液器：30-300μL量程一支
? 白色、黃色和藍(lán)色吸頭若干 ? 恒溫培養(yǎng)箱
? 均質(zhì)器或絞肉機(jī)
? 甲醇，分析純
? 二甲基亞砜，分析純
1.樣本前處理
準(zhǔn)備
(1) 樣本提取液
分別取甲醇70mL和二甲基亞砜 30mL混勻備用。
(2) 1×sample diluent
取4×sample diluent1份，加入3份去離子水混勻，比如1mL+3mL
辣椒油、火鍋底料
火鍋底料、凝固性油樣，可以加熱至樣品溶化后再稱量
(1) 稱取0.2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min;
(2) 4000rpm，離心5min；
(3) 取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻；
(4) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻
(5) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×sample diluent混勻
稀釋倍數(shù)：1
干辣椒
粉碎后，過40目篩
(1) 稱取0.2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min;
(2) 4000rpm，離心5min；
(3) 取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻；
(4) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻
(5) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×sample diluent混勻
稀釋倍數(shù)：1
新鮮辣椒以及辣椒醬等辣椒制品
在均質(zhì)器或料理機(jī)上均質(zhì)呈勻漿
(1) 稱取0.2g均質(zhì)的樣本于一合適的容器中，加入10mL樣本提取液渦旋2min;
(2) 4000rpm，離心5min；
(3) 取上層液體0.1mL，加入9.9mL去離子水混勻；
(4) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.9mL去離子水混勻
(5) 再取0.1mL上一步混勻后溶液，加入0.1mL1×sample diluent混勻
稀釋倍數(shù)：1
2. 檢測步驟
檢測前準(zhǔn)備
所有試劑需回復(fù)至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）;
檢測開始前需準(zhǔn)備好所需試劑；
取出所需體積的試劑，其余放回盒內(nèi)；
未使用完的試劑請勿倒回原試劑瓶內(nèi)，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；
請不要在通風(fēng)口、陽光直射下檢測，以避免造成微孔微環(huán)境差異導(dǎo)致檢測失敗；
標(biāo)準(zhǔn)品、陽性樣本以及用過的吸頭和器皿均應(yīng)做有毒廢棄物處理。
洗液（1×）配制
取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻
檢測步驟
移取50μL辣椒素標(biāo)準(zhǔn)品至相應(yīng)微孔中；
移取50μL樣本至相應(yīng)微孔中；
移取50μL酶結(jié)合物至所有微孔中；
加入50μL辣椒素抗體至每一所需微孔中，用手指肚輕輕敲擊微孔板架兩側(cè)混勻1min；
室溫（20-25℃）孵育20min；
甩干微孔板，加入300μL 洗液（1×），浸泡5s后倒出洗液，再重復(fù)4次，甩干并于無塵布上拍干；
加入100μL底物，室溫（20-25℃）避光孵育10min;
加入100μL終止液，于450nm下讀數(shù)。
3. 結(jié)果計算
(1)以logit(B/B0）為y軸，以log（分析物濃度）為x，進(jìn)行線性擬合。
其中公式如下
a. logit(B/B0)=k ln?〖(concentration)+c〗①
b. B為標(biāo)準(zhǔn)品或樣本對應(yīng)的吸光度；
c. B0為零標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的吸光度；
logit(B/B0)=〖ln(〗?〖(B/B0)/(1-B/B0))〗;
d. K為斜率；
e. C為截距
(2)計算出樣本的平均吸光度和樣本的B/B0值代入公式①中求出濃度并乘以對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即為樣本中待測物最終濃度；辣度換算公式【求得的濃度C樣，（C樣×1.142）/10，即為樣本的辣度】
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