黃曲霉毒素B1 ELISA快速檢測試劑盒

Aflatoxin B1 Test kit

（貨號：Ounuo98001）

一、原理

黃曲霉毒素B1 ELISA快速檢測試劑盒, 本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物黃曲霉毒素B1將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭黃曲霉毒素B1抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素B1的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物黃曲霉毒素B1的含量。

二、試劑盒特性

1） 試劑盒靈敏度：   0.02ppb

2）孵育溫度：       25℃

3）孵育時(shí)間：       30min～15min

4)  樣本檢測下限

飼料 大米、玉米、花生、組織、食用油··········· 2 ppb

5) 交叉反應(yīng)率

黃曲霉毒素B1 ···· 99.9%

黃曲霉毒素M1 ··· 6.6%

黃曲霉毒素B2 ··· 83%

黃曲霉毒素G1 ··· 107%

黃曲霉毒素G2 ··· 42%

6) 樣本回收

飼料 大米、玉米、花生、組織、食用油 ··· 95±35%

三、樣本前處理步驟

1） 樣本處理前須知

（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2）樣本前處理需配制：

配液1  樣本復(fù)溶液：

用去離子水將20×濃縮復(fù)溶液按1：19稀

釋（1份20×濃縮復(fù)溶液+19份去離子水）。

配液2  樣本提取液：

將甲醇與去離子水按7:3比例混合均勻（7份甲醇+3份去離子水）。

四、操作步驟

1、  從2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、  取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。

3、  配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

4、  編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5、  加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境反應(yīng)30min。

6、  將孔內(nèi)液體甩干，用稀釋后的洗滌液250µl/孔洗板4～5次，每次間隔15～30秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

7、  顯色：加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。

8、  測定：加入終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，5min內(nèi)讀數(shù)），測定每孔OD值。