乳品塑化劑檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)：Ounuo95002）

一、原理

乳品塑化劑檢測(cè)試劑盒,本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法，在微孔條 上預(yù)包被鄰苯二甲酸二正丁酯抗原，樣本中的殘留 物鄰苯二甲酸二正丁酯將和酶標(biāo)板包被的抗原競(jìng)爭(zhēng) 鄰苯二甲酸二正丁酯抗體，用 TMB 底物顯色，樣 本吸光值與其所含殘留物鄰苯二甲酸二正丁酯的含 量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物 鄰苯二甲酸二正丁酯的含量。

二、試劑盒特性

? 試劑盒靈敏度： 30ppb

? 孵育溫度： 25℃

? 孵育時(shí)間： 15min～15min

? 樣本檢測(cè)下限

液態(tài)奶········· 30ppb

牛、羊乳粉········210ppb

? 交叉反應(yīng)率

鄰苯二甲酸二正丁酯········ 99.9%

? 樣本回收率

液態(tài)奶············ 90% ±30%

牛、羊乳粉············ 90% ±30%

三、試劑盒組成

1 微量測(cè)試孔 每條 8 孔，一板 12 條

2 標(biāo)準(zhǔn)品×5 瓶 （1ml/瓶） 0ppb 30ppb 90ppb 270ppb 810ppb

3 酶標(biāo)記物 7ml 紅色帽

4 抗體工作液 7ml 藍(lán)色帽

5 底物 A 液 7ml 白色帽

6 底物 B 液 7ml 黑色帽

7 終止液 7ml 黃色帽

8 20X 濃縮洗滌液 20ml 透明帽

9 Sample Diluent 50ml 白色蓋 （注意：為了方便后續(xù)結(jié)果求值，已將稀釋倍數(shù)乘 入標(biāo)準(zhǔn)品中，結(jié)果無(wú)需再乘稀釋倍數(shù)）

四、所用儀器、試劑

具備的儀器：酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、天平（感 量 0.01g）。 微量移液器：?jiǎn)蔚?20µl～200µl、單道 100µl～ 1000µl、多道 30～300 µl。

試 劑：純化水。

五、樣本前處理步驟

? 樣本處理前須知

（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試 劑時(shí)要更換吸頭。

（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈， 必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí) 驗(yàn)結(jié)果。

? 樣本前處理需配制：

配液 洗滌液 將 20X 濃縮洗滌液與純化水按 1：19 比例稀 釋后混合均勻。

? 樣本處理：

（a）液態(tài)奶

1、 取 100ul 均質(zhì)后的樣本，加入 400ul 樣本稀釋-液，充分震蕩；

2、 取下層液體用于分析。 樣本稀釋倍數(shù): 1 倍

（b）牛、羊乳粉

1、 取 1g 均質(zhì)后的樣本，加入 6ml 純化水，充分 震蕩；

2、 取 100ul 稀釋后的樣本，加入 400ul 樣本稀釋-液，充分震蕩；

3、 取下層液體用于分析。 樣本稀釋倍數(shù): 7 倍

六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

? 測(cè)定前應(yīng)須知：

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫 （20～25℃）。

2、 使用之后立即將所有試劑放回 2～8℃。

3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于 洗板的一致性，正確的洗板操作是 ELISA 測(cè)定 程序中的要點(diǎn)。

4、 所有恒溫孵育過(guò)程，避免光線照射，用蓋板膜 蓋住微孔板。

? 操作步驟：

1、 從 2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～ 25℃）平衡 30min 以上，注意每種液體試劑使 用前均需搖勻。

2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放 入自封袋，保存于 2-8℃。

3、 編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每 個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和 樣本孔所在的位置。

4、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本 50µl/孔到各自的微孔中，然后加 入酶標(biāo)記物 50µl/孔，再加入抗體工作液 50µl/ 孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻。25℃環(huán)境 中反應(yīng) 15min。

5、 將孔內(nèi)液體甩干，用已稀釋的洗滌液 250µl/孔 洗板 4～5 次，每次間隔 15～30 秒，用吸水紙 拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺 破）。

6、 顯色：加入底物 A 液 50µl/孔，再加入底物 B 液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜封板，25℃ 環(huán)境中避光顯色 15min。

7、 測(cè)定：加入終止液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè) 定酶標(biāo)儀于 450nm 處（建議用雙波長(zhǎng) 450/630n m 檢測(cè)，5min 內(nèi)讀數(shù)），測(cè)定每孔 OD 值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第 1 種方 法，定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與 其所含鄰苯二甲酸二正丁酯量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定： 用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出 其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.5， 樣本 2 的吸光度值為 1.0，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是： 0ppb 為 1.653； 30ppb 為 1.385；90ppb 為 1.056； 270ppb 為 0.826；810ppb 為 0.453。則樣本 1 的濃度 范圍是 270ppb～810ppb；樣本 2 的濃度范圍是 90ppb～270ppb，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本 中鄰苯二甲酸二正丁酯實(shí)際濃度。

2、定量分析 （1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分 吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值（雙 孔）除以0 標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，再乘 以 99.9%，即 百分吸光率（%）＝ B ×99.9% B0 B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值 （2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以鄰苯二甲酸 二正丁酯標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲 線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以 其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中鄰苯二甲酸二正丁 酯實(shí)際濃度。 若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于 大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來(lái)電索?。?

八、 注意事項(xiàng)

1、 室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫（20～ 25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。

2、 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì) 伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。 所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。