Counstar Rigel S3在鄰域的應用

免疫療法，如CAR-T治療包括從病人收集外周血單核細胞（PBMC），然后分離所需的T細胞亞群，通過基因改造產(chǎn)生工程CAR-T細胞，CAR-T細胞在體外大規(guī)模擴增后再回輸?shù)交颊摺?Countstar Rigel S3系統(tǒng)可以對整個CAR-T生產(chǎn)過程中細胞濃度，活率進行監(jiān)測，并且符合GMP的要求。

AO/PI雙熒光法檢測活率：

吖啶橙和碘化丙啶是可以和細胞核核酸結合的熒光染料。AO可以穿透活細胞和死細胞對細胞核進行染色并發(fā)出綠色熒光，PI進入死細胞對細胞和進行染色并發(fā)出紅色熒光。因此AO/PI為細胞核染料，可以準確區(qū)分活細胞與死細胞，而且可以排除雜質或者非特異細胞的干擾，進行精準的濃度活率檢測。

AO/PI雙熒光染色法PBMC細胞圖像

細胞凋亡：

細胞凋亡的測定是通過測量細胞早期凋亡激活的標記來了解細胞如何死亡。 這些是凋亡細胞的特定生物化學和形態(tài)學標記，而在正常細胞和壞死細胞中不發(fā)生的此變化。 使用Countstar FL通過Hoechst 33342，Annexin V-FITC，PI標記細胞, 可以將細胞分成不同的階段。 該Counstar軟件可以通過直接計數(shù)提供即時結果。

圖 4 K562靶細胞與效應細胞混合培養(yǎng)3h 后，Hoechst 33342，CFSE，PI染色的熒光圖像

GFP轉染

GFP可通過轉基因技術引入動物細胞或其他微生物。 Countstar Rigel S3為檢測GFP轉染提供了一種快速簡便的檢測方法。 用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）染色來確定總細胞群和死細胞群以及檢測表達GFP的群體。 該軟件可以通過直接計數(shù)給出即時結果（包括GFP陽性百分比，濃度和活率）。

圖 9使用Hoechst 33342（藍色）定位活細胞，并且可以容易地確定表達GFP的細胞（綠色）的百分比。 用碘化丙錠（PI;紅色）染色死細胞。