LAD2 人肥大細(xì)胞說明書 

一、細(xì)胞基本信息

細(xì)胞全稱：LAD2 人肥大細(xì)胞系

細(xì)胞來源：人急性髓系白血病患者外周血分離建立的永生化肥大細(xì)胞系

細(xì)胞特性：懸浮或半貼壁生長，保留成熟肥大細(xì)胞核心表型，表達(dá)FcεRI高親和力IgE受體、，受IgE交聯(lián)刺激后可穩(wěn)定釋放組胺、β-己糖胺酶等炎癥介質(zhì)，是目前過敏相關(guān)研究常用的人源肥大細(xì)胞模型。

推薦應(yīng)用場景：IgE介導(dǎo)的過敏反應(yīng)機(jī)制研究、肥大細(xì)胞活化抑制劑藥物篩選、炎癥因子釋放通路驗(yàn)證。

二、培養(yǎng)基配方

該細(xì)胞對營養(yǎng)要求較高，常規(guī)RPMI 1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基需針對性補(bǔ)充關(guān)鍵組分：

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：RPMI 1640 含L

血清添加：10% 熱滅活胎牛血清，提前篩選適配的穩(wěn)定血清批次

核心添加劑：重組人IL-3 10 ng/mL、重組人SCF（干細(xì)胞因子）100 ng/mL

可選添加：雙抗1%，避免支原體污染

三、標(biāo)準(zhǔn)傳代操作流程

培養(yǎng)條件：37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)

傳代密度：嚴(yán)格維持細(xì)胞接種密度在 ?2×10^5 個(gè)/mL?，最高培養(yǎng)密度不超過1×10^6 個(gè)/mL，密度過高會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活率驟降、表型丟失

傳代操作：無需消化，直接在超凈臺內(nèi)吸取部分細(xì)胞懸液，用預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)基按1:2~1:3的比例稀釋分瓶，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱即可。

換液策略：每2~3天半量換液，離心收集細(xì)胞后棄去一半舊培養(yǎng)基，加入等量預(yù)熱新鮮培養(yǎng)基重懸，避免全量換液導(dǎo)致細(xì)胞自分泌生長因子丟失，引發(fā)細(xì)胞凋亡。

四、關(guān)鍵質(zhì)控與注意事項(xiàng)

活率要求：正常培養(yǎng)狀態(tài)下細(xì)胞活率應(yīng)長期維持在90%以上，活率低于80%時(shí)需檢查SCF、IL-3活性是否失效，或血清批次是否適配。

表型驗(yàn)證：每10代需通過流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證FcεRI、CD117（c-Kit）的陽性表達(dá)率，確認(rèn)細(xì)胞未發(fā)生表型漂移。

活化實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作：開展IgE介導(dǎo)脫顆粒實(shí)驗(yàn)時(shí)，提前用特異性IgE抗體致敏細(xì)胞過夜，次日加入抗原交聯(lián)刺激，30分鐘后檢測上清中β-己糖胺酶釋放率，正?；罨M釋放率應(yīng)達(dá)到總酶活的30%~50%。

禁忌：絕對不能使用不含SCF的培養(yǎng)基長期培養(yǎng)細(xì)胞，會(huì)在3~5天內(nèi)快速引發(fā)細(xì)胞凋亡、肥大細(xì)胞核心功能表型丟失。

小腸隱窩上皮細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

小腸粘膜上皮細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

小梁網(wǎng)細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

小梁網(wǎng)細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

小梁網(wǎng)細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

小氣道平滑肌細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

小氣道上皮細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

心房肌細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

心肌成纖維細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

心肌成纖維細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

心肌成纖維細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

心肌成纖維細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

心肌細(xì)胞包裝：5 ×105次方（1ml）

心肌細(xì)胞包裝：5 ×105次方（1ml）

心肌細(xì)胞包裝：5 ×105次方（1ml）

心室肌細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

新生兒表皮角化細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

雪旺氏細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）

雪旺氏細(xì)胞包裝：5 × 105次方（1ml）