大腸桿菌O157測試片24片/包

1 原理及適用范圍：菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1mL(g)檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù)，是zui常用的檢測項(xiàng)目指標(biāo)。菌落總數(shù)測試片（Aerobic Count Plates BB202）是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基，冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑——氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在測試片上呈紫紅色或粉紅色，這樣可縮短計(jì)數(shù)時(shí)間和增強(qiáng)計(jì)數(shù)效果。本產(chǎn)品適合于食品及水中菌落總數(shù)的測定，也可用于與食品接觸的容器操作臺(tái)和其他設(shè)備表面的衛(wèi)生檢測。

2  樣品處理與稀釋

2.1 生活飲用水：取充分混勻的水樣（原液）檢測。

2.2 水源水：以無菌操作方法吸取1mL充分混勻的水樣，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，混勻成1:10稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的稀釋液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每次換一支吸管。

2.3 食品：取樣品 25 mL（g）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，充分混勻成1:10稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的稀釋液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每次換一支吸管。

3 接種：將菌落總數(shù)測試片（BB202）置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開上層膜準(zhǔn)備接種。生活飲用水、純水和礦泉水取原液，每個(gè)樣品做兩片；水源水以及食品選擇2～3個(gè)稀釋度進(jìn)行檢測，每個(gè)稀釋度同時(shí)應(yīng)做一平行接種。以無菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL混勻的樣品液，慢慢均勻地滴加到測試片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。每次檢測，同時(shí)將1mL滅菌生理鹽水滴加到另一片測試片上作為空白對(duì)照。

4 培養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。

5 結(jié)果判讀: 細(xì)菌在測試片上生長后會(huì)顯示紅色斑點(diǎn)，選擇菌落數(shù)適中（10～100個(gè)）的測試片進(jìn)行計(jì)數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（克）樣品中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。作菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用眼睛直接觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各測試片菌落數(shù)后，應(yīng)求出同稀釋度的平均菌落數(shù)，供下一步計(jì)算時(shí)用。

6 計(jì)數(shù)原則及報(bào)告方式

6.1通常選擇菌落在10～100個(gè)之間的測試片進(jìn)行計(jì)數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見表1實(shí)例1）。

6.2若有兩個(gè)稀釋度的菌落數(shù)在10～100個(gè)之內(nèi)，兩者的比值小于2，則取其平均數(shù)，若大于2，則用值小者（見表1實(shí)例2、例3）。

6.3若三個(gè)稀釋度的菌落數(shù)都有在10～100個(gè)之內(nèi)，應(yīng)選擇二個(gè)低數(shù)值的平均數(shù)（見表1實(shí)例4）。

6.4若三個(gè)稀釋度的菌落數(shù)均小于10個(gè)或大于100個(gè)時(shí)，應(yīng)重新試用更低或更高的稀釋度進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)；或采用均小于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui小值，或采用均大于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui大值（見表1實(shí)例5、例6）。

6.5若所有稀釋度的測試片均無生長，以未檢出報(bào)告之。菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采樣兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可用10的指數(shù)來表示。

表1  稀釋度選擇及菌落總數(shù)報(bào)告方式

7 表面取樣方法：加1mL滅菌生理鹽水在測試片上，靜置至少1h使培養(yǎng)基凝固；提起上層膜，使*濾紙部分貼到待測物表面，用手在外側(cè)輕壓；然后將上蓋膜合上，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

方法原理：采用選擇性顯色培養(yǎng)基作為主要原料，加入專一性酶顯色劑，運(yùn)用微生物測試片技術(shù)，做成一次性快速檢驗(yàn)產(chǎn)品，通過接種、培養(yǎng)，如果樣品中含有大腸桿菌O157:H7，即可在紙片上呈現(xiàn)紫紅色的菌落。

3操作方法

3．1樣品處理：無菌操作取25g（mL）樣品放入含有225mL無菌生理鹽水的采樣瓶或均質(zhì)杯內(nèi)，充分振搖或置均質(zhì)器中制成樣品勻液，靜置片刻。

3．2接種：將測試片水平放在臺(tái)面上，小心揭開上蓋膜，用滅菌吸管吸取1 mL樣品上清液或增菌液，均勻加到*的濾紙片上，然后輕輕將上蓋膜放下，靜置5min。每個(gè)樣品接種兩片。

3．3培養(yǎng)：將加了樣的測試片疊放在一起，放入原來的自封袋中，堆疊片數(shù)不超過12片，透明膜向上平放在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)15h～24h。

3．4結(jié)果觀察：對(duì)測試片進(jìn)行觀察，呈紫紅色的菌落為大腸桿菌O157:H7；呈藍(lán)色的菌落為其他大腸菌群。

4附加說明

4．1本法還可應(yīng)用于從業(yè)人員體檢、中毒樣品和物體表面的檢測，用取樣棉簽涂抹被測物體表面，放入裝有3mL滅菌生理鹽水的試管中，搖晃10s，然后取1mL接種到測試片上。

4．2注意使用過的紙片上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。

4．3出現(xiàn)陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗(yàn)證，沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗(yàn)一次。

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