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瓊脂糖凝膠電泳的原理及實驗過程2022/04/30

實驗原理瓊脂糖凝膠電泳常用于分離、鑒定DNA、RNA分子混合物，以瓊脂凝膠作為支持物，利用DNA分子在電場中時的電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，達(dá)到分離混合物的目的。DNA分子在高于其等電點的溶液中帶負(fù)電，在電場中由陰極向陽極運(yùn)動。在一定的電場強(qiáng)度下，忽略DNA分子攜帶的電荷，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應(yīng)，即分子本身的大小和構(gòu)型是主要的影響因素。DNA分子的遷移速度與相對分子量成反比。不同構(gòu)型的DNA分子的遷移速度不同。如環(huán)形DNA分子樣品，其中有三種構(gòu)型的分子：超螺旋分子（cccDNA）、開環(huán)分

蛋白質(zhì)技術(shù)專題：凝膠過濾層析實驗2022/04/30

凝膠過濾層析（gelfiltrationchromatography）法又稱排阻層析或分子篩方法，主要是根據(jù)蛋白質(zhì)的大小和形狀，即蛋白質(zhì)的質(zhì)量進(jìn)行分離和純化。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖類物質(zhì)，使蛋白質(zhì)混合物中的物質(zhì)按分子大小的不同進(jìn)行分離。實驗方法蛋白質(zhì)的凝膠過濾分離實驗材料蛋白質(zhì)試劑、試劑盒凝膠過濾緩沖液儀器、耗材布氏漏斗凝膠過濾層析柱分光光度計實驗步驟1.如果凝膠過濾的介質(zhì)是干粉，則需在凝膠過濾緩沖液中*溶脹。2.在遠(yuǎn)離過往通道及直接光照的恒溫環(huán)境，將層折柱垂

蛋白質(zhì)技術(shù)專題：血清蛋白瓊脂糖凝膠電泳2022/04/30

【原理】瓊脂糖（agarose）是經(jīng)過挑選，以質(zhì)地較純的瓊脂（agar）作為原料而制成的。瓊脂在化學(xué)上是由瓊脂糖和瓊脂膠組成的復(fù)合物。瓊脂膠是一含有硫酸根和羥基的多糖，它具有離子交換性質(zhì)，這種性質(zhì)會給電泳及凝膠過濾以的影響。瓊脂糖是直鏈多糖，它由D－半乳糖和3,6－脫水－L－半乳糖的殘基交替排列組成。瓊脂糖主要通過氫鍵而形成凝膠。電泳時因凝膠含水量大（98－99%），近似自由電泳，因為固體支持物的影響少，故電泳速度快，區(qū)帶整齊。而且由于瓊脂糖不含帶電荷的基團(tuán)，電滲影響很少，是一種較好的電泳材料，

蛋白質(zhì)技術(shù)專題：SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測外源蛋白的表達(dá)2022/04/30

[實驗原理]SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中經(jīng)常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基*（SDS）以及巰基乙醇一起加熱，使蛋白變性，多肽鏈內(nèi)部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結(jié)合而帶負(fù)電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝膠中向正極遷移。不同的大小的肽鏈由于在遷移時受到的阻力不同，在遷移過程中逐漸分開，其相對遷移率與分子量的對數(shù)間成線形關(guān)系。pGLO是將綠色熒光蛋白（GFP）的基因克隆在阿拉伯糖啟動子之后的一種表達(dá)載體。攜帶

蛋白質(zhì)技術(shù)專題：聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度2022/04/30

（一）原理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制，因此可以形成“連續(xù)系統(tǒng)”和“不連續(xù)系統(tǒng)”兩種電泳系統(tǒng)?！安贿B續(xù)系統(tǒng)”大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是：（1）使用兩種不同濃度的凝膠系統(tǒng)；（2）配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同，并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也不相同。在實驗中，電泳凝膠分為兩層：上層膠為低濃度的大孔膠，稱為濃縮膠或成層膠，配制此層膠的緩沖液是Tris-HCl，pH6.7；下層膠則是高濃度的小孔膠，稱為分離膠或電泳膠，成膠的緩沖液是Tris-HC

蛋白質(zhì)技術(shù)專題：蛋白等電聚焦凝膠電泳技術(shù)（一）2022/04/30

1.原理等電聚焦凝膠電泳是依據(jù)蛋白質(zhì)分子的靜電荷或等電點進(jìn)行分離的技術(shù)，等電聚焦中，蛋白質(zhì)分子在含有載體兩性電解質(zhì)形成的一個連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質(zhì)是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負(fù)極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質(zhì)分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在電場中移動；當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)遷移至其等電點位置時，其靜電荷數(shù)為零，在電場中不再移動，據(jù)此將蛋白質(zhì)分離。等電聚焦中，只有在凝膠兩端給以高電壓時，才能獲得較好的蛋白質(zhì)條帶分辨率，這就需要非常有效的凝膠冷卻系統(tǒng)（否

蛋白質(zhì)技術(shù)專題：蛋白等電聚焦凝膠電泳技術(shù)（二）2022/04/30

8.常見問題及解釋1）若產(chǎn)生模糊條帶則證明聚焦不*，這可能是由于電泳中的問題或大分子蛋白質(zhì)限制了其在凝膠中的遷移能力。若聚焦時間過長或過短，條帶的分辨率會下降。增加電壓梯度可以使帶形更加銳利。高分子量蛋白質(zhì)在瓊脂糖凝膠中可以聚焦的更好。2）產(chǎn)生歪斜的條帶通常由于不正確的pH梯度，檢查電極是否潔凈，是否同凝膠鏈接良好，同時應(yīng)該注意凝膠的邊緣效應(yīng)。3）蛋白帶的紋理現(xiàn)象是等電聚焦中經(jīng)常遇到的問題，可能是一下原因：a，蛋白質(zhì)聚集或沉淀（尤其在等電點附近），或上樣量過大，8M尿素通常用來防止蛋白質(zhì)聚集，去

專題蛋白質(zhì)技術(shù)的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗2022/04/30

[原理]蛋白質(zhì)在十二烷基*（SDS）和巰基乙醇的作用下，分子中的二硫鍵還原，氫鍵等打開，形成按1.4gSDS/1g蛋白質(zhì)比例的SDS-蛋白質(zhì)多肽復(fù)合物，該復(fù)合物帶負(fù)電，故可在聚丙烯酰胺凝膠電泳中向正極遷移，且主要由于凝膠的分子篩作用，遷移速率與蛋白質(zhì)的分子量大小有關(guān)，因此可以濃縮和分離蛋白質(zhì)多肽。聚丙烯酰凝膠電泳分離蛋白質(zhì)多數(shù)采用一種不連續(xù)的緩沖系統(tǒng)，主要分為較低濃度的成層膠和較高濃度的分離膠，配制凝膠的緩沖液，其pH值和離子強(qiáng)度也相應(yīng)不同，故電泳時，樣品中的SDS-多肽復(fù)合物沿移動的界面移動，

技術(shù)專題：凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質(zhì)2022/04/30

（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質(zhì)（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應(yīng)除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優(yōu)點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所需時間也短，但其凝膠過濾后樣品體積較大。所以，要根據(jù)具體情況選擇使用。前實驗中樣品體積較小，凝膠達(dá)濾后樣品體積不會太增加，所以選用凝膠過濾法。（二）試劑與器材（1）SephadexG-25。（2）0.

凝膠成像分析系統(tǒng)的選擇2022/04/30

凝膠成像分析系統(tǒng)的選擇關(guān)鍵詞：凝膠成像分析系統(tǒng)化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)，多色熒光成像分析系統(tǒng)，多功能活體成像分析系統(tǒng)一、前言：隨著生物學(xué)研究的逐漸加深和生物學(xué)相關(guān)的分子生物交叉學(xué)科研究逐步加深，分子成像分析系統(tǒng)的實際應(yīng)用逐漸的普遍化，但是現(xiàn)在廣大的用戶面對市場上品牌眾多進(jìn)口和國產(chǎn)的分子影像成像分析系統(tǒng)怎么樣選擇是一個難題。二、分子影像成像分析系統(tǒng)包括成像系統(tǒng)和分析軟件系統(tǒng)，成像系統(tǒng)包括：，相機(jī)，暗室，透射儀，UV和白光照明、琥珀色濾光玻片和UV防護(hù)罩等小配件，相機(jī)根據(jù)CCD有可以分為有低到高：45萬

如何選購凝膠成像分析系統(tǒng)2022/04/30

關(guān)鍵詞：凝膠成像分析系統(tǒng)化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)，多色熒光成像分析系統(tǒng)，多功能活體成像分析系統(tǒng)一、前言：分子生物學(xué)作為一門基礎(chǔ)科學(xué)，分子生物學(xué)已滲透到現(xiàn)代生物學(xué)的各個學(xué)科分支，隨著生物學(xué)理論與實驗方法的不斷進(jìn)步，它的應(yīng)用領(lǐng)域也在不斷擴(kuò)大?，F(xiàn)在，生物學(xué)的影響已經(jīng)擴(kuò)展到食品、化工、環(huán)境保護(hù)、能源、冶金等等諸多領(lǐng)域的發(fā)展。生物學(xué)的分支學(xué)科各有一定的研究內(nèi)容而又相互依賴、互相交叉。此外，生命作為一種物質(zhì)運(yùn)動形態(tài)，有它自己的生物學(xué)規(guī)律，同時又包含并遵循物理和化學(xué)的規(guī)律。因此，生物學(xué)同物理學(xué)、化學(xué)有著密切的關(guān)系

電泳時膠回收和凝膠成像的注意事項2022/04/30

電泳時膠回收切膠的注意事項：1.電泳的buffer和gel都是新制的，切膠的臺子清理干凈，刀片好洗凈，總之一句話就是保證切下的帶沒有外源dna污染。2.切膠是要把整個目的片斷所在位置的膠全部回收。為了減少膠的體積，可以用相對比較薄的膠來做，只要夠點樣即可，也可采用薄而寬的梳子來跑膠。3.關(guān)于防護(hù)，在一般有機(jī)玻璃后就足夠了，戴上防護(hù)面具以保護(hù)眼睛，如果戴樹脂眼鏡就可以了。要是非常害怕紫外照射，或者對于膠有特殊要求，例如要求不含EB，可以采用點marker和帶刻度的尺子一起照相的方法來確定目的條帶在

凝膠成像CCD和與CMOS的區(qū)別2022/04/30

每個公司生產(chǎn)的凝膠成像從結(jié)構(gòu)上看都是差不多的，都可以用于DNA/RNA/蛋白質(zhì)等凝膠電泳不同染色（如EB、考馬氏亮藍(lán)、銀染）等非化學(xué)發(fā)光成像檢測分析，主要區(qū)分看凝膠成像的靈敏度與分辯率，要想拍出的圖像質(zhì)量好主要是取決于CCD的尺寸、像素，還有成像的一個軟件功能。關(guān)于CCD的介紹：一：CCD是ChargeCoupledDevice(電荷耦合器件)的縮寫,它是一種半導(dǎo)體成像器件,因而具有靈敏度高、抗強(qiáng)光、畸變小、體積小、壽命長、抗震動等優(yōu)點。（1）CCD尺寸與圖像質(zhì)量CCD尺寸是影響其成像表現(xiàn)力的一

凝膠成像系統(tǒng)的四個基本選購原則(一)2022/04/30

如何從紛繁的市場上選擇到一款好的成像設(shè)備呢？很多號稱-的設(shè)備是否真的能夠打滿分呢？擁有一臺好的、運(yùn)行穩(wěn)定的設(shè)備是實驗者的心愿。下面的文章就向您介紹選擇成像系統(tǒng)的“四個基本選購原則”。原則一：“只選對的，不選貴的”市場上各品牌、各型號的成像儀林林種種，但是從成像原理上可以分成兩大類，分別是拍照成像和掃描成像。拍照成像簡單說就是樣品和相機(jī)的相對位置不動，可以進(jìn)行單次成像或多次成像；掃描成像則是相機(jī)對樣品進(jìn)行局部成像，然后通過樣品或相機(jī)的移動對整個樣品進(jìn)行成像。拍照成像目前主要采用CCD相機(jī)成像，由于

凝膠成像系統(tǒng)的四個基本選購原則(二)2022/04/30

如何從紛繁的市場上選擇到一款好的成像設(shè)備呢？很多號稱-的設(shè)備是否真的能夠打滿分呢？擁有一臺好的、運(yùn)行穩(wěn)定的設(shè)備是實驗者的心愿。下面的文章就向您介紹選擇成像系統(tǒng)的“四個基本選購原則”。原則三：“只比對的，不比費(fèi)的”我們崇尚實踐，然而，現(xiàn)實經(jīng)常不配合我們，或者是沒有Demo機(jī)，或者是有時我們還真的很難根據(jù)實驗結(jié)果分辨出性能上的差異，這時候第三項原則將至關(guān)重要。當(dāng)我們在考察儀器Demo的情況后還是無法分辨其性能之優(yōu)劣時，除了可以了解其他人的使用情況和評價，就只能推開儀器看參數(shù)了。當(dāng)然看參數(shù)是有竅門的。

凝膠成像系統(tǒng)內(nèi)主要光源的介紹2022/04/30

凝膠成像系統(tǒng)內(nèi)主要光源的介紹，凝膠成像系統(tǒng)，顧名思義以一套可對凝膠進(jìn)行成像的光學(xué)系統(tǒng)，而光源便是其光路系統(tǒng)的重要組成部分，可以說沒了光源，成像系統(tǒng)幾乎無法運(yùn)行使用，但與CCD、鏡頭以及分析軟件相比，往往卻沒有得到應(yīng)有的重視。我們經(jīng)常遇到這樣的用戶，他們知道系統(tǒng)光源出現(xiàn)故障或整個系統(tǒng)報廢的時候都不知道凝膠成像透射紫外中有305nm與365nm兩種紫外燈管，或者搞不清他們之間有何區(qū)別。這其中固然有銷售商售后的不到位，但也反映出我們對凝膠成像系統(tǒng)光源的不重視和缺乏足夠的了解，為此我們撰以此文，以期幫助

凝膠成像概述（一）2022/04/30

凝膠成像定義凝膠成像即對dna/rna/蛋白質(zhì)等凝膠電泳不同染色（如eb、考馬氏亮藍(lán)、銀染、sybrgreen）及微孔板、平皿等非化學(xué)發(fā)光成像檢測分析。凝膠成像系統(tǒng)可以應(yīng)用于分子量計算,密度掃描,密度定量,PCR定量等生物工程常規(guī)研究。凝膠成像系統(tǒng)的原理樣品在電泳凝膠或者其他載體上的遷移率不一樣，以標(biāo)準(zhǔn)品或者其他的替代標(biāo)準(zhǔn)品相比較就會對未知樣品作一個定性分析。這個就是圖像分析系統(tǒng)定性的基礎(chǔ)。根據(jù)未知樣品在圖譜中的位置可以對其作定性分析，就可以確定它的成份和性質(zhì)。樣品對投射或者反射光有部分的吸收，

凝膠成像概述（二）2022/04/30

凝膠成像一般操作步驟1．打開凝膠成像系統(tǒng)開關(guān)。2．打開電腦，系統(tǒng)自動打開并進(jìn)入成像軟件。3．打開凝膠成像系統(tǒng)前面板，選擇使用紫外透射光源或者白光透射光源，將相應(yīng)光源安放到位。4．將樣品放置在透射光源的樣品臺上。5．在成像操作界面里面選擇使用Upperwhite光源，點擊綠色（即時成像）按鈕。常見問題1、是不是像素越高，產(chǎn)品就越好？像素是要針對成像設(shè)備來看的，比如數(shù)碼相機(jī)與CCD的像素就不具備可比性，其次CCD本身的質(zhì)量比單純的像素高低更重要。對于同級別CCD*重要的指標(biāo)是其大小，也就是CCD尺寸

核酸蛋白和紫外檢測儀的原理及選購指南2022/04/30

核酸蛋白檢測儀是層析分析的主要裝置，核酸蛋白檢測儀配上層析柱、恒流泵、部分收集器、層析譜分析系統(tǒng)（根據(jù)需要選配）和電腦打印設(shè)備即構(gòu)成一套完整的核酸蛋白檢測儀分離層析系統(tǒng)。它是當(dāng)今從事生命科學(xué)研究、**測定、化工、食品科學(xué)及醫(yī)學(xué)研究等行業(yè)的現(xiàn)代分析實驗儀器。核酸蛋白檢測儀分析系統(tǒng)廣泛用于工業(yè)、農(nóng)業(yè)、科研和大專院校的科學(xué)研究和教學(xué)實驗。其原理是根據(jù)物質(zhì)（樣品）對紫外光有明顯吸收的特征，實現(xiàn)對樣品成份含量比對分析，以便進(jìn)行樣品蛋白、核酸物質(zhì)識別檢測和含量測定。在生化分析、環(huán)保科學(xué)、食品研究、毒理研究、

國產(chǎn)核酸蛋白檢測儀的發(fā)展與性能2022/04/30

國產(chǎn)核酸蛋白檢測儀的發(fā)展與性能層析分離技術(shù)是我國高校《生化分析實驗》中的基礎(chǔ)實驗。70年代后期國內(nèi)研制的“核酸蛋白檢測儀”，使用某一波長（280nm或254nm等）進(jìn)行定性檢測分離，用記錄儀描譜，長期在高校實驗室使用。在我國科技人員努力下，近年來，市場上相繼出現(xiàn)了可代替記錄儀的“電腦采集器”、“電腦核酸蛋白檢測儀”、“雙波長電腦核酸蛋白檢測儀”、“層析-電導(dǎo)聯(lián)用系統(tǒng)”等產(chǎn)品，迅速應(yīng)用到教學(xué)實驗、科學(xué)研究生產(chǎn)領(lǐng)域。一、檢測原理所有紫外吸收檢測器工作原理都是基于光的吸收定律---朗伯-比耳定律。該定