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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>大鼠試劑盒里的TMB顯色液為啥不能見(jiàn)光放置?
結(jié)合大鼠ELISA全流程實(shí)驗(yàn)質(zhì)控、跨物種樣本適配、試劑穩(wěn)定性管控的相關(guān)背景,大鼠ELISA試劑盒的TMB底物必須避光保存,核心原因可從分子特性、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、長(zhǎng)期穩(wěn)定性三個(gè)維度詳細(xì)說(shuō)明:
TMB分子本身的光敏感性特質(zhì)?
TMB(3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺)是典型的氧化型顯色底物,分子結(jié)構(gòu)中的芳香胺基團(tuán)在光照下會(huì)被直接激發(fā),無(wú)需辣根過(guò)氧化物酶催化就會(huì)發(fā)生非特異性氧化反應(yīng),讓原本無(wú)色透明的底物提前自發(fā)變藍(lán),直接失去后續(xù)可控顯色的能力,部分批次的TMB底物在強(qiáng)光下放置數(shù)小時(shí)就會(huì)失效。
直接破壞檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性?
見(jiàn)光分解后的TMB會(huì)讓空白孔的本底OD值異常升高,信噪比大幅下降,低濃度大鼠靶標(biāo)蛋白的弱陽(yáng)性信號(hào)會(huì)被高背景掩蓋,催生大量假陰性、假陽(yáng)性結(jié)果,同時(shí)不同孔位的底物受光程度不均,會(huì)直接放大復(fù)孔之間的信號(hào)偏差,讓批內(nèi)CV值遠(yuǎn)超15%的合格閾值。
大幅縮短試劑的有效保質(zhì)期?
長(zhǎng)期光照會(huì)加速TMB底物的活性衰減,原本2~8℃可保存6個(gè)月的底物,在強(qiáng)光環(huán)境下1~2個(gè)月就會(huì)失活,同時(shí)不同批次底物的光降解程度存在隨機(jī)差異,會(huì)直接破壞批量大鼠樣本檢測(cè)的批間重復(fù)性,讓不同酶標(biāo)板之間的檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)無(wú)規(guī)律的漂移,最終造模動(dòng)物的組間對(duì)比數(shù)據(jù)失去參考價(jià)值。
日常保存時(shí)需將TMB底物裝入棕色避光瓶,置于陰暗干燥的2~8℃環(huán)境中,全程避免陽(yáng)光直射,使用過(guò)程中也盡量減少開(kāi)蓋暴露在強(qiáng)光下的時(shí)間,維持其顯色活性穩(wěn)定。
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