碳水化合物試驗(yàn)步驟：

1、貼壁細(xì)胞用胰酶消化，離心收集。

2、細(xì)胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次，離心收集。試驗(yàn)步驟2再重新作一邊。

3、加入5mlDNA提取緩沖液，（10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS）,混勻。

4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達(dá)到100ug/ml,混勻，50℃水浴3h,

5、用等體積的酚抽提一次，2500rpm離心收集水相，用等體積的（酚，）混合物抽提一次，2500r/min離心收集水相

6、用等體積的，抽提一次。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻，冰浴，10min.。

7、2500rpm離心10min.轉(zhuǎn)上清于一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10min。2500rpm,離心10min。棄上清。

8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉（PH5.2）與2倍體積-20℃預(yù)冷無水乙醇。-20℃20min。

9、12000r/min,室溫離心5min。棄上清。將DNA溶于適量TE中。

碳水化合物技術(shù)原理：

(1).抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。

(2).結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。

(3).酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。

(4).受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。

(5).此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

(6).加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度pg-ng/ml水平，并且重復(fù)性好。以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特-反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)