單抗制備為什么融合后細(xì)胞不長或者融合后克隆很少？
 
可以從這幾個方面考慮：
 
1、免疫用的動物品系不正確或者品系不純。免疫用的動物一般應(yīng)該與骨髓瘤來源的動物是相同品系，例如使用SP2/0骨髓瘤細(xì)胞時應(yīng)該選用Balb/C小鼠，同時必須使用品系純正的小鼠。
 
2、培養(yǎng)基中加入了過高濃度的HAT，或者僅A的濃度過高或HT的濃度過低，建議用純的骨髓瘤和已有的雜交瘤作HAT濃度篩選。
 
3、培養(yǎng)基不正確或血清濃度不正確或使用了劣質(zhì)血清。
 
4、未正確制備飼養(yǎng)層細(xì)胞。參見本站有關(guān)飼養(yǎng)層細(xì)胞制備的部份。
 
5、接種雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)板過多。一般在5-20塊96孔板為宜。
 
6、融合后，未及時轉(zhuǎn)移或稀釋細(xì)胞。有人在做融合后喜歡把融合的細(xì)胞先放在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，然后再滴到96孔板上。如果在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的時間過長，也可能出現(xiàn)克隆利率少的情況。
 
7、細(xì)胞被污染。在顯微鏡下仔細(xì)觀察是否有明顯的微生物污染。即使看不到有明顯的微生物，也應(yīng)該考慮是否有支原體污染，有條件的可以做支原體檢測。
 
8、細(xì)胞培養(yǎng)條件不正確，確保細(xì)胞培養(yǎng)在恒定的37度較濕的環(huán)境，同時保證CO2濃度在4-5%左右。
 
9、其它與融合條件相關(guān)的不恰當(dāng)?shù)囊蛩亍?/span>