細(xì)胞凋亡方法步驟：

1、三尖杉酯堿誘發(fā)HL-60細(xì)胞凋亡

　?。?）實(shí)驗(yàn)前約24小時(shí)，接種兩瓶HL-60細(xì)胞，標(biāo)記①、②，每瓶含約6ml培養(yǎng)液，置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

　?。?）實(shí)驗(yàn)前約2.5小時(shí)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到70%，①號(hào)瓶加入三尖杉酯堿200μl，使終濃度為1μg/ml，②號(hào)瓶中加入同等量PBS（pH7.4）作對(duì)照。共同放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2.5小時(shí)。

2、Ho33342和PI雙重染色鑒別三種細(xì)胞

　　（1）染色：將瓶中的細(xì)胞搖勻取200μl于1.5ml的離心管中，加入Ho33342母液2μl，PI 20μl，染色15分鐘。

　?。?）滴片：取一載玻片用雙面膠圍成一小室，從離心管中各取以上染色后的細(xì)胞懸液10μl，加入小室內(nèi)蓋上蓋玻片，熒光鏡下用紫外激發(fā)光，高倍鏡下觀察，區(qū)別三種細(xì)胞，并注意三者比例。

注意事項(xiàng)：

1、誘導(dǎo)培養(yǎng)HL-60細(xì)胞時(shí)間要準(zhǔn)確；

2、熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞時(shí)，由于熒光易碎滅，觀察時(shí)要盡量快。