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1）加入1ml Trizol試劑，混勻，冰上孵育10min。
2）4℃，12000rpm離心10min，小心轉(zhuǎn)移上清液到不含顆粒的新EP管中。
3）加入200ul氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫孵育5min。
4）4℃，12000rpm離心15min?；旌弦悍秩龑?，包括最下面的C6H5OH - 氯仿有機相，中間相和上層水相。小心轉(zhuǎn)移上層水相到新的EP管（大約60％體積的Trizol），不要吸取中間相，可留下少量上層液體！（Note：質(zhì)量比數(shù)量更重要?。?/span>
5）加入等體積的異丙醇，輕輕地顛倒混勻約10次，室溫放置10min。
6）4℃，12000rpm離心10min。棄上清，1ml 75％乙醇洗滌RNA沉淀兩次。
7）4℃，12000rpm離心5min，棄上清，室溫下風干5-10min（不要太干，過度干燥會導致RNA難溶解！）。將RNA溶于15μl-50μlDEPC水中。
8）立即進行反轉(zhuǎn)錄反應，或先-80℃長期保存。
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