細(xì)胞系污染是細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的問(wèn)題，尤其是在長(zhǎng)期培養(yǎng)或跨實(shí)驗(yàn)室傳遞過(guò)程中，容易引入污染源，如細(xì)菌、真菌、HeLa細(xì)胞等。豬細(xì)胞系也不例外，若發(fā)生污染，可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果甚至導(dǎo)致研究失敗。因此，判斷細(xì)胞是否污染是科研實(shí)驗(yàn)中不能缺少的一環(huán)。

判斷豬細(xì)胞系是否污染，可以參考以下幾種方法：

一、肉眼觀察：

1、培養(yǎng)基顏色：正常情況下，培養(yǎng)基顏色應(yīng)為紅色或粉色。如果出現(xiàn)橙色、黃色或培養(yǎng)基變渾濁，可能表明污染。

2、細(xì)胞瓶身：檢查是否有裂縫，裂縫可能意味著污染。

二、顯微鏡檢查：

1、細(xì)菌污染：顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)小顆粒，如桿菌或球菌，培養(yǎng)基可能很快變黃且渾濁。

2、真菌污染：觀察到菌絲、霉斑或卵圓形散在細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間，真菌生長(zhǎng)較慢，但一旦發(fā)現(xiàn)，污染嚴(yán)重。

3、支原體污染：細(xì)胞生長(zhǎng)變慢，可能出現(xiàn)小黑點(diǎn)，但培養(yǎng)基通常不發(fā)生渾濁。

4、細(xì)胞交叉污染：顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)明顯不同，計(jì)數(shù)時(shí)細(xì)胞直徑有差異。

5、黑膠蟲(chóng)污染：20X顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞間隙有小黑點(diǎn)，會(huì)蠕動(dòng)。

三、STR/SNP鑒定：

STR是細(xì)胞鑒定的“金標(biāo)準(zhǔn)"，可與quanwei數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，確認(rèn)是否發(fā)生交叉污染。

四、DNA條形碼技術(shù)：

適用于確認(rèn)細(xì)胞是否為豬源，避免其他物種污染。

五、實(shí)驗(yàn)記錄和比對(duì)：

對(duì)比正常細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線、形態(tài)和培養(yǎng)基顏色，發(fā)現(xiàn)異常變化。

六、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境管理：

保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境整潔，個(gè)人衛(wèi)生，減少污染風(fēng)險(xiǎn)。

七、參考標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫(kù)：

與ATCC、DSMZ等數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)STR數(shù)據(jù)，確認(rèn)細(xì)胞系身份。

八、注意事項(xiàng)

?定期檢測(cè)?：建議每2-3周進(jìn)行支原體檢測(cè)，尤其是長(zhǎng)期培養(yǎng)的細(xì)胞系。

?污染處理?：確認(rèn)污染后需立即丟棄培養(yǎng)物，并對(duì)培養(yǎng)箱、器材chedi消毒。

九、結(jié)論與建議

1、優(yōu)先使用STR基因分型進(jìn)行細(xì)胞身份驗(yàn)證，是目前zui可靠的方法。

2、結(jié)合肉眼和顯微鏡觀察作為初步篩查手段。

3、定期進(jìn)行細(xì)胞鑒定，特別是在實(shí)驗(yàn)前后和細(xì)胞傳代較多時(shí)。