操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

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商品屬性：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大鼠 NOSTRIN 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 BCAP31 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 COPS3 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 PRL4A1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 OAT 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 CDKN2AIPNL 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 KCNA10 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 MYL12A 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 FGG 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 TRIP4 基因全長(zhǎng)ORF克隆

BRL 3A (大鼠肝細(xì)胞)50次 白色念珠菌RNAout   0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Cytosolic beta-glucosidase

50T 偽狂犬病毒PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 23

1g α-  Chymotrypsin 4℃保存1% NaC1阿拉伯糖發(fā)酵管進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)1% NaC1阿拉伯糖發(fā)酵管20支BR

金黃菌顯色培養(yǎng)基 Staphylococcus Chromogenic Medium 1000(ML) 7.8-500 ng/mL ELISA Kit for Human Beta, beta-carotene 9', 10'-oxygenase

2 ug pFBDM pFBDM 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人胃動(dòng)蛋白2(GKN2)ELISA試劑盒

2 ug pCAMBIA2300 pCAMBIA2300 低溫運(yùn)輸，-20℃保存胰蛋白胨大豆快綠瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Tryptic Soy Fast Green Agar250克濾膜細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定和分離培養(yǎng)

20µL HRP標(biāo)記的兔抗GST標(biāo)簽多抗 Anti GST-Tag Rabbit PAb,HRP -20℃保存 15.6-1000 pg/mL 綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測(cè)試劑盒

250mL HEPES Buffer,1M,pH6.5  HEPES Buffer,1M,pH6.5  常溫保存WORT肉湯進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)WORT Broth250克真菌和酵母菌的培養(yǎng)

250mL EDTA Solution（EDTA溶液）,0.5M,pH7.4  EDTA Solution,0.5M,pH7.4  常溫保存

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 (TSB)（顆粒）  250g 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human N(G), N(G)-dimethylarginine dimethylaminohydrolase 2

50T 小反芻獸RT-PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員2B(WNT2B)ELISA試劑盒