當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>科研細(xì)胞>>原代細(xì)胞>> 大鼠嗅鞘細(xì)胞說明書
| 貨號 | BJ-X97366 |
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操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
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產(chǎn)品名稱 | 大鼠嗅鞘細(xì)胞說明書 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X97366 |
商品屬性:
名稱 大鼠嗅鞘細(xì)胞說明書 2.組織來源:嗅球組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介: 大鼠嗅鞘細(xì)胞分離自嗅球組織;嗅鞘細(xì)胞(OECs)是在功能上介于施旺細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞之間的一種特殊的膠質(zhì)細(xì)胞,具有神經(jīng)營養(yǎng)、抑制膠質(zhì)增生、瘢痕形成、成鞘作用等;為軸突生長提供了適宜的微環(huán)境及較強(qiáng)的遷移的特性,使其成為促進(jìn)中樞神經(jīng)再生的理想候選細(xì)胞之一。嗅鞘細(xì)胞是目前所發(fā)現(xiàn)的極少數(shù)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)可以再生細(xì)胞之一,其特點(diǎn)為終身具有神經(jīng)再生功能,還能夠釋放多種神經(jīng)營養(yǎng)因子、神經(jīng)粘附分子。被認(rèn)為是髓鞘化能力*的膠質(zhì)細(xì)胞,逐漸用于治療脊髓損傷。嗅鞘細(xì)胞與膠質(zhì)細(xì)胞、雪旺細(xì)胞在表現(xiàn)型上有共同點(diǎn),它們都能促進(jìn)軸突的再生,主要區(qū)別在于嗅鞘細(xì)胞不但存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng),也存在于外周神經(jīng)中。嗅鞘細(xì)胞被認(rèn)為是一種可塑性很高的細(xì)胞,它可表現(xiàn)出多種細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞表面標(biāo)志,在嗅系統(tǒng)發(fā)育過程中,嗅鞘細(xì)胞根據(jù)其在組織定位的不同而有不同的抗原表型,其中P75NTR、GFAP、和O4可標(biāo)記大部分在體嗅鞘細(xì)胞,然而在嗅球外神經(jīng)層O4陽性嗅鞘細(xì)胞仍然可以在P75NTR陽性細(xì)胞層內(nèi)分化成E-NCAM陽性的細(xì)胞層,還有一定比率的嗅鞘細(xì)胞P75NTR陰性而NY和S100表型為陽性。嗅黏膜中的神經(jīng)元是生后才生長并在成年時繼續(xù)分化的神經(jīng)元,壽命為4-12周,隨著新細(xì)胞的生長,又建立了新的神經(jīng)支配關(guān)系。嗅鞘細(xì)胞存在于嗅神經(jīng)及嗅球的神經(jīng)層上,沿嗅神經(jīng)的全長,從周圍神經(jīng)系統(tǒng)到中樞神經(jīng)分布。 5.方法簡介: ()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠嗅鞘細(xì)胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法、結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測: ()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠嗅鞘細(xì)胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R113 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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MSA培養(yǎng)基 英文名稱:MSA Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
AK瓊脂(2號) 英文名稱:AK Agar(No.2) 產(chǎn)品規(guī)格:250g
| 小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)elisa試劑盒 | Mouse anti-Thyroid-Peroxidase antibody, TPO-Ab Elisa Kit |
| 小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)elisa試劑盒 | Mouse Brain derived neurotrophic facor, BDNF Elisa Kit |
| 小鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)elisa試劑盒 | Mouse apoptosis inducing factor, AIF Elisa Kit |
| 小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)elisa試劑盒 | Mouse Bone morphogenetic protein 2, BMP-2 Elisa Kit |
| 小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)elisa試劑盒 | Mouse Bone morphogenetic protein 4, BMP-4 Elisa Kit |
| 小鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)elisa試劑盒 | Mouse Bone morphogenetic protein receptor 1A, BMPR-1A Elisa Kit |
| 小鼠堿性磷酸酶(ALP)elisa試劑盒 | Mouse alkaline phosphatase, ALP Elisa Kit |
| 小鼠血管生成素4(ANG-4)elisa試劑盒 | Mouse Angiopoietin 4, ANG-4 Elisa Kit |
| 小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)elisa試劑盒 | Mouse Bone morphogenetic protein receptor Ⅱ, BMPR-Ⅱ Elisa Kit |
| 小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)elisa試劑盒 | Mouse major histocompatibility complex-Ⅲ, MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ Elisa Kit |
| 小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)elisa試劑盒 | Mouse E-Cadherin, E-Cad Elisa Kit |
| 小鼠CD30分子(CD30)elisa試劑盒 | Mouse Cluster of differentiation 30, CD30 Elisa Kit |
| 小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱelisa試劑盒 | Mouse major histocompatibility complex-Ⅱ, MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ Elisa Kit |
| 小鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)elisa試劑盒 | Mouse soluble endothelial protein C receptor, sEPCR Elisa Kit |
| 小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)elisa試劑盒 | Mouse eosinophil chemotactic factor, ECF Elisa Kit |
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