細胞復蘇操作步驟

時間：2022/2/22閱讀：664

在實際操作中，凍存細胞要進行復蘇，再培養(yǎng)傳代。復蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結(jié)晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細胞。

細胞復蘇操作步驟：

1．佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出冷凍管。

2．迅速放入37℃水浴中，并不時搖動，在1分鐘內(nèi)使其*融化，然后在無菌下取出細胞。

3．在150g速度下離心5～10分鐘，棄去上層液

4．加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，接種濃度1×109 cell/L，置37℃溫箱靜置培養(yǎng)

5．次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長情況。

6．若細胞密度較高，及時傳代。

注意事項

在細胞復蘇操作時，應注意融化凍存細胞速度要快，可不時搖動冷凍管，使之盡快通過最易受損的溫度段(-5～0℃)。這樣復蘇的凍存細胞存活率高，生長及形態(tài)良好。

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