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貨號(hào)	FS-01S63537

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公司產(chǎn)品僅用于科研提供的生化試劑盒，質(zhì)量信得過(guò)產(chǎn)品，售后*。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位，竭誠(chéng)為您提供更周到的服務(wù)更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。

產(chǎn)品名稱：PLD磷脂酶D檢測(cè)試劑盒微量法
規(guī)格：100管/96樣

檢測(cè)方法：微量法

貨號(hào)：FS-01S63537
商品介紹：

測(cè)定意義

磷脂酶D（EC3.1.4.4）即磷脂酰水解酶，是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應(yīng)的一類酶的總稱，廣泛存在于高等動(dòng)植物和細(xì)菌等多種生物體中，具有參與細(xì)胞脂質(zhì)代謝、信號(hào)傳導(dǎo)、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。

測(cè)定原理

磷脂酶D催化水解磷脂酰末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸，在氧化酶催化作用下生成甜菜堿和*，*在*酶的作用下將4-氨基安替比和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì)，在500nm處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、微量石英比色皿、恒溫水浴鍋，無(wú)水乙醇。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)胞或組織樣品的制備：

培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

試劑的組成和配制：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
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鐵調(diào)(Hepc)聯(lián)免疫試劑盒地衣芽孢桿Rat CLEC2C (C-Type Lectin Domain Family 2 Member C) ELISA Kit

粒集落激因子(G-CSF)聯(lián)免疫試劑盒盤(pán)長(zhǎng)孢狀盤(pán)孢Rat CNP (C-Type Natriuretic Peptide)ELISA Kit

肝生長(zhǎng)因子(HGF)聯(lián)免疫試劑盒蠟蚧Rat CTACK (Cutaneous T-Cell Attracting Chemokine) ELISA Kit

β干擾(IFN-β)聯(lián)免疫試劑盒IBV M41 HAR/HI serum 陽(yáng)性血清（荷蘭引進(jìn)）Rat CXCR3 (CXC-Chemokine Receptor 3) ELISA Kit

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白介6(IL-6)聯(lián)免疫試劑盒唐菖蒲青霉Rat CDKN2A (Cyclin Dependent Kinase Inhibitor 2A) ELISA Kit

白介10(IL-10)聯(lián)免疫試劑盒冷變紫薄層Rat CCND1 (Cyclin D1) ELISA Kit

白介17(IL-17)聯(lián)免疫試劑盒粉紅單端孢霉Rat CCND2 (Cyclin D2) ELISA Kit

γ干擾(IFN-γ)聯(lián)免疫試劑盒就地堆肥地芽孢桿Rat CCND3 (Cyclin D3) ELISA Kit

腫瘤壞死因子α(TNF-α)聯(lián)免疫試劑盒克魯維畢赤酵母克魯維變種Rat CYPA (Cyclophilin A) ELISA Kit
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磷化原癌基因CBL2抗體Human GDF3(Growth Differentiation Factor 3) ELISA Kit兔子胰島樣生長(zhǎng)因子2（IGF-2）ELISA試劑盒,

β鏈接相互作用蛋白1抗體Human fT3(Free Triiodothyronine) ELISA Kit前列腺F（PGF）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人

磷化β鏈接相互作用蛋白1抗體Human GDF6(Growth Differentiation Factor 6) ELISA Kit寶石橙蛋白染色試劑

磷化β 連環(huán)蛋白抗體Human GDH/GLDH(Glutamate dehydrogenase) ELISA Kit三氧化銻

葉綠體蛋白抗體（植物）Human GDF7(Growth Differentiation Factor 7) ELISA Kit銥海棉

磷化后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體Human fT4(Free Thyroxine) ELISA Kit人抗肺泡基底膜抗體（ABM-Ab）ELISA試劑盒, ABM-Ab ELISA kit

磷化絲切蛋白抗體Human FGα(Fibrinogen Alpha) ELISA Kit人組織蛋白K（cath-K）ELISA試劑盒, cath-K ELISA