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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>>人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理>> 48T/96TDyn人強(qiáng)啡肽ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
IL-2R人白介素2受體ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
PCDH1人原鈣黏素ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
LTA人淋巴毒素αELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
ALDH人乙醛脫氫酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
FⅫ人凝血因子ⅫELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢(shì)如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測(cè)指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
產(chǎn)品名稱 | Dyn人強(qiáng)啡肽ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Human dynorphin, Dyn Elisa Kit |
貨號(hào) | FS-H63317 |
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。 但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)
Yersinia Pseudotuberculosis 假結(jié)核耶爾森氏菌Yersinia Pseudotuberculosis凍干安全等級(jí):1模式菌株:no營養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。生長條件:30℃,好氧 純度:98%
Yersinia enrocolitica 腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌Yersinia enrocolitica凍干管,斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):2模式菌株:no營養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。傳代方法①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無菌或培養(yǎng)基:充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。生長條件:26-29℃,好氧存儲(chǔ)條件:2-8℃冷藏,凍干管10年以上,斜面1-3個(gè)月。 純度:≥97%
Brevundimonas diminuta 缺陷短波單胞菌Brevundimonas diminuta凍干安全等級(jí):1模式菌株:no營養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。pH7.0。121℃,15min。生長條件:37℃,好氧 純度:98%
Pediococcus acidilactici Lindner 乳片球菌Pediococcus acidilactici Lindner凍干管,斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:乳菌培養(yǎng)基: Ⅱ:Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract () 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐溫) 80 1g K2HPO4 2g Na-aceta (醋鈉) 5g Diamine citra (檸檬二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled war (蒸餾) 1000m pH 6.5-6.8。121℃,15min。傳代方法①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無菌或培養(yǎng)基:充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。生長條件:30℃,好氧存儲(chǔ)條件:2-8℃冷藏 純度:98%
Clostridium tyrobutyricum 酪丁梭菌Clostridium tyrobutyricum凍干管,斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:no產(chǎn)丁生孢梭菌培養(yǎng)基:胰蛋白胨 10.0克 10.0克 葡萄糖 5.0克 5.0克 酵母膏 3.0克 醋鈉 3.0克 可溶性淀 1.0克 半胱氨 0.5克 瓊脂 0.5克 pH6.8±0.2,蒸餾 1000ml 強(qiáng)化梭培養(yǎng)基:,F(xiàn)T傳代方法①凍干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂輪在凍干管壁劃兩圈,掰斷,用200μL無菌或培養(yǎng)基:充分溶解,平板涂布,活化培養(yǎng)。 ②斜面:試管口用75%酒精擦拭后,火焰灼燒,后用無菌接種鏟切塊,挑取接入平板或斜面,培養(yǎng)。生長條件:37℃,厭氧,存儲(chǔ)條件:2-8℃冷藏 純度:97%
Bifidobacrium│longum 長雙歧桿菌Bifidobacrium│longum分離基物:健康嬰兒糞便凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no食品發(fā)酵,原料預(yù)處理加工,抗膽汁鹽,抗胃,抗氧化;用于益生菌類食品。CM0787生長條件:37℃存儲(chǔ)條件:-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Staphylococcus albus Rosenbach 白色葡萄球菌Staphylococcus albus Rosenbach凍干安全等級(jí):1模式菌株:no營養(yǎng)肉汁瓊脂:蛋白胨 5.0g,牛肉浸取物 3.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH 7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時(shí)加入5mg MnSO4•H2O,則有利于產(chǎn)生芽孢。生長條件:37℃,好氧 純度:98%
Lisriawelshimeri 威爾氏李斯特菌Lisriawelshimeri安全等級(jí):1模式菌株:no檢測(cè)用菌2生長條件:30℃ 純度:98%
Dyn人強(qiáng)啡肽ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理RPMI 1640,(1X),液體(IVD)黃豆黃素(R)-1,1′-聯(lián)萘-2,2′-二基磷酰Inhibin beta B 抑制素βB抗原
RPMI 1640,(1X),液體(IVD)大豆苷(R)-1,1′-聯(lián)萘-2,2′-二基磷酰Integrin Alpha3 整合素α3抗原
RPMI 1640,干
(IVD)大豆苷元雙(六乙酰)合銅(II)Integrin Beta5 整合素β5抗原
染料木素雙(六乙酰)合銅(II)Integrin alpha 1 整合素α1抗原
RPMI 1640,干
(IVD)染料木苷3-甲氧基苯硫酚Integrin Alpha4 Beta7/LPAM-1 (Lymphocyte Peyer’s patch Adhesion Molecule 1/Integrin alpha4,beta7) 整合素α4β7抗原
RPMI 1640,(1X),液體 ( IVD)歐前胡素3-甲氧基苯硫酚Integrin AlphaE2/CD103 整合素αE2抗原
DMEM(低糖),液體異歐前胡素3-甲氧基苯硫酚ENPP3/CD203c(ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase 3) ENPP3抗原
DMEM(低糖),干遠(yuǎn)志L-(-)-半乳糖IQGAP1 支架蛋白抗原
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