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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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EGFR/HER2抑制劑

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產(chǎn)品型號(hào)

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-18 15:56:21瀏覽次數(shù):263次

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中文名稱:EGFR/HER2抑制劑

英文名稱:Afatinib dimaleate

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號(hào):FS-X10542

產(chǎn)品介紹:

Afatinib dimaleate是一種不可逆的EGFR/HER2抑制劑,有效作用于野生型和突變型EGFR和HER2,作用于EGFRwt,EGFRL858R,EGFRL858R/T790M和HER2,IC50分別為0.5nM,0.4nM,10nM和14nM。

注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號(hào):850140-73-7

別名:BIBW 2992MA2;BIBW2992;Afatinib

純度:99.81%

分子量:718.08

儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

新疆鹽地桿菌線粒體脫偶連蛋白2抗體Anti-LIMK2 Antibody神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4(NT4)

擴(kuò)展青霉線粒體脫偶連蛋白3抗體Anti-LIMK1 Antibody神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT3)

丁梭菌UBX結(jié)構(gòu)域域蛋白D2抗體Anti-LIF Antibody(PB0067)神經(jīng)型一氧化氮合(NOS1)

紅色蠟?zāi)⒎毫蝓?/span>L3抗體Anti-LMAN1 Antibody神經(jīng)酰激(CERK)

側(cè)孢短芽孢桿菌泛硫酯L1+3抗體Anti-LIN28A Antibody神經(jīng)纖維網(wǎng)蛋白2(NRP2)

大腸桿菌人狀瘤病E6相關(guān)蛋白抗體Anti-LIPC Antibody神經(jīng)纖維網(wǎng)蛋白1(NRP1)

膠孢泛蛋白連接Q1抗體Anti-LMNB2 Antibody神經(jīng)纖維2(NF2)

大腸埃希氏菌泛蛋白連接U抗體Anti-LMO1 Antibody神經(jīng)纖維1(NF1)

嗜假諾卡氏菌泛載體蛋白L6抗體Anti-LMO2 Antibody神經(jīng)黏附分子(NCAM)

禾谷鐮孢菌*泛激活2H抗體Anti-LONP1 Antibody神經(jīng)外營(yíng)養(yǎng)蛋白4(NXPH4)

嗜乳桿菌泛蛋白連接G1抗體Anti-LMTK3 Antibody神經(jīng)外營(yíng)養(yǎng)蛋白3(NXPH3)

棒曲霉泛蛋白連接E1抗體Anti-LOC134147/CMBL Antibody神經(jīng)外營(yíng)養(yǎng)蛋白2(NXPH2)

枯草芽孢桿菌枯草亞種泛蛋白連接E3抗體Anti-LOC134147/CMBL Antibody神經(jīng)外營(yíng)養(yǎng)蛋白1(NXPH1)

Marisediminicola泛蛋白連接2E2抗體Anti-LOX Antibody神經(jīng)突蛋白1(NRN1)

黃絮鱗鵝膏菌泛蛋白連接D4抗體Anti-LOXL2 Antibody神經(jīng)調(diào)節(jié)肽U受體1(NMUR1)

環(huán)狀芽胞桿菌泛蛋白連接D3抗體Anti-LOR Antibody神經(jīng)調(diào)節(jié)4(NRG4)

SET結(jié)合蛋白1抗體熱紫鏈霉菌大鼠腎上皮細(xì)胞

電壓門控鈉通道5α抗體巴氏生孢八疊球菌大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞

沉默調(diào)節(jié)蛋白5抗體大腸桿菌BS-3234大鼠腎小管上皮細(xì)胞

葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4增強(qiáng)因子抗體膿腫分枝桿菌大鼠腎足突細(xì)胞
EGFR/HER2抑制劑皺膜假絲酵母 5--3-支原體

泰安羧利用桿 變藍(lán)白痢雞傷寒抗體

長(zhǎng)雙歧桿 甘氨酰甘芐酯對(duì)甲苯磺鹽副嗜血桿

玫瑰色熱微 甘芐酯鹽鹽P53蛋白

球毛殼 4-氟苯氧基乙酰肼H9型病

Roseivivax isoporae 4-(三氟甲氧基)芐傷門氏抗體

蠟蚧 3,5-二硝基-L-酪副傷門氏抗體

乳乳球乳亞種 1-乙炔基環(huán)戊禽呼腸孤病

貝倫格葡萄座腔 4--3-(三氟甲基)苯甲禽痘病

三葉草根瘤 Tyr-Phe禽腦脊髓炎病

堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿 蘇丹藍(lán)II禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病

破傷風(fēng)梭 對(duì)硝基肉桂禽白血病病

纖細(xì)芽孢桿 2,2-二甲基琥珀酐傳染性法氏囊病

桃色歐文氏 4-溴苯鄰二傳染性喉氣管炎病

大腸埃希 (S)-(+)-5-羥甲基-2-吡咯烷酮禽呼腸孤病抗體

 


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