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貨號(hào)	FS-X10620

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：CDK1/CDK2/CDK9抑制劑(AZD-5438)

英文名稱：AZD-5438

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10620

產(chǎn)品介紹:

AZD-5438是一種有效的CDK1/2/9抑制劑，IC50值分別為16nM/6nM/20nM；同時(shí)抑制GSK3β，對(duì)CDK5/6的作用較弱。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：602306-29-6

純度：99.84%

分子量：371.46

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

巨大芽孢桿菌羅丹明標(biāo)記的小鼠抗兔IgMAnti-SLC2A4 Antibody含Rho關(guān)聯(lián)卷曲螺旋蛋白激2(Rock2)

放射形根瘤菌辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗小鼠IgGAnti-SLC2A4 Antibody(PB0143)含RCC1和BTB域蛋白2(RCBTB2)

阿魏側(cè)耳-天山2號(hào)辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-SLC2A5 Antibody含PR域蛋白10(PRDM10)

淡紫擬青霉PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgMAnti-SLC2A5 Antibody含MOCO硫化羧基端域蛋白1(MOSC1)

球色單隔孢屬辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗猴IgGAnti-SLC2A5 Antibody含MANSC域蛋白1(MANSC1)

植物乳桿菌堿性磷（AP）標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-SLC2A6 Antibody含Kazal型絲蛋白抑制劑域蛋白1(KAZALD1)

登戶鏈霉菌Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗兔IgMAnti-SLC2A9 Antibody含F(xiàn)YVE域鋅指蛋白27(ZFYVE27)

海考克氏菌Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗兔IgMAnti-SLC2A8 Antibody含F(xiàn)YVE域鋅指蛋白26(ZFYVE26)

枯草芽孢桿菌PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgMAnti-SLC2A9 Antibody含F(xiàn)YVE域鋅指蛋白16(ZFYVE16)

黑曲霉堿性磷（AP）標(biāo)記的兔抗馬IgMAnti-SLC31A1 Antibody含CUB域蛋白1(CDCP1)

赭曲霉膠體金標(biāo)記的兔抗馬IgMAnti-SLC2A9 Antibody(PB0915)含BED型鋅指蛋白3(ZBED3)

柿瑞恩氏酵母Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗馬IgMAnti-SLC30A4 Antibody含Ⅲ型纖連蛋白域蛋白5(FNDC5)

放射型根瘤菌APC標(biāo)記的兔抗馬IgMAnti-SLC31A1 Antibody海藻糖(TREH)

都濃哈馬達(dá)氏菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗馬IgMAnti-SLC34A2 Antibody海馬鈣蛋白(HPCA)

蘇云金芽孢桿菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗馬IgMAnti-SLC39A6 Antibody過(guò)氧化物體增殖物激活受體δ(PPARδ)

局限青霉Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗馬IgMAnti-SLC4A1 Antibody(PB0393)過(guò)氧化物體增殖物激活受體γ輔激活因子1α(PPARγC1α)

NYS48蛋白抗體威氏李斯特氏菌大鼠乳腺上皮細(xì)胞提取物

肌痙攣性癲癇病相關(guān)EPM2蛋白抗體布氏假單胞菌大鼠淋巴成纖維細(xì)胞提取物

非霍奇金淋巴瘤重復(fù)蛋白2抗體佐氏庫(kù)特氏菌大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞提取物

非霍奇金淋巴瘤重復(fù)蛋白3抗體熱帶伯克霍爾德氏菌大鼠卵巢成纖維細(xì)胞提取物
CDK1/CDK2/CDK9抑制劑(AZD-5438)嗜堿芽孢桿 2,5-二甲基布魯氏

皺膜假絲酵母 2-羥基喹喔啉傳染性鼻肺炎

黃曲霉 1-(2,3-二)哌鹽鹽溶

紅城紅球茴香偶姻弓形蟲(chóng)IgG

枯草芽孢桿枯草亞種 2-甲氧基-5-褪黑

有害片球四氫-2 2-二甲基-4H-吡喃-4-酮多巴

Bradyrhizobium Bradyrhizobium 3-奎寧環(huán)酮鹽鹽色C

桃吉爾霉甲基吡咯-2-羧酯CD40配體

惡臭假單胞 4,6-二嘧啶皮質(zhì)

松鼠葡萄球 Rocuronium Bromide前列腺E2

蔥 3-正十六烷基噻吩I型膠原蛋白

大腸埃希氏 (S)-(-)-2-(二苯甲基)吡咯烷雌三

世紀(jì)紅簍環(huán)丁酮雌酮

蠟蚧輪枝孢 4-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)苯馬烯雌酮

假單胞 1，10-癸二硫促腎上腺皮質(zhì)
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)