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貨號	FS-X9713

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：500T|1000T

貨號：FS-X9713

產(chǎn)品介紹:

綠色熒光細(xì)胞活性檢測試劑盒是采用一種可對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，檢測細(xì)胞增殖情況。當(dāng)熒光染色試劑其進(jìn)入到細(xì)胞質(zhì)后，酯酶會將其水解并留在細(xì)胞內(nèi),發(fā)出強(qiáng)綠色熒光，它的細(xì)胞毒性很低，不會抑制任何的細(xì)胞功能如增殖或淋巴球的趨化性。

儲存條件：-20℃避光保存。

有效期：一年。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

骨粘連蛋白(ON)英文名：ON β淀粉樣肽（1-28）抗體包裝5g

骨形成蛋白6(BMP-6)英文名：BMP-6 有絲分裂激B抗體包裝5g

骨形成蛋白(BMPs)英文名：BMPs 軟骨蛋白聚糖抗體包裝25g

骨涎蛋白(BSP)英文名：BSP 去整合樣金屬蛋白10抗體包裝5g

骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)英文名：CTX-2 含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號抑制物盒蛋白家族9抗體包裝100mg

骨特異性堿性磷B(ALP-B)英文名：ALP-B 含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號抑制物盒蛋白家族8抗體包裝1ml

骨特性堿性磷(BALP)英文名：BALP 植物生長激ABP1抗體包裝25ml

骨橋(OPN)英文名：OPN 肌動蛋白相關(guān)蛋白1抗體包裝5ml

骨膠原交聯(lián)(Cr)英文名：Cr α紅分化相關(guān)因子抗體包裝1g

骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)英文名：OT/BGP 血管緊張激活蛋白1抗體包裝5g

骨鈣(OT)英文名：OT Alpha清蛋白抗體包裝1g

骨鈣(BGP)英文名：BGP AFAP1L2抗體包裝1g

骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)英文名：BMPR-Ⅱ 神經(jīng)分化相關(guān)蛋白AHNAK抗體包裝5MG

骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)英文名：BMPR-1A 粘合連接相關(guān)蛋白1抗體包裝1g

骨成型蛋白9(BMP-9)英文名：BMP-9 去整合樣金屬蛋白13抗體包裝5g

脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)2型蛋白抗體轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)Fluticasone Propionate is a synthetic glucocorticoid, used to treat non-allergic
Calcein AM細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒新疆溶桿 2-氨基異丁酸乙酯鹽酸鹽谷氧還蛋白1

黑木耳 2-基苯基酸1,3-酯谷氧還蛋白2

擬青霉福沙吡坦骨保護(hù)

堅強(qiáng)芽孢桿 5-甲氧基-1H--3-甲酸甲酯骨成型蛋白2

皺環(huán)球蓋菇 1-N-Cbz-4-N-(Boc-氨甲基)骨成型蛋白4

米蘭鏈霉 3-氨基-2-基-6-溴吡骨成型蛋白6

規(guī)則東方喜鹽芐基-2-乙骨成型蛋白7

枯草芽孢桿 3-溴-5-(三氟甲基)芐骨成型蛋白受體2

白酒鉛 2-氨基-4,6-二-5-甲?；奏す氢}

釀酒酵母道古霉骨堿性磷酸

玫瑰淡紫鏈霉對羥基乙酯骨堿性磷酸

黑色淺灰鏈霉 PD158780骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)

弗吉尼亞鏈霉 2,4-二甲基吡咯-3-羧酸骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)

鐮刀 4-溴-3-甲氧基甲酯骨橋

根瘤 (4-溴-2-基)甲骨特異性堿性磷酸

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