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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
初級會(huì)員 | 第9年

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c-Met/ALK抑制劑

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-23 14:56:17瀏覽次數(shù):251次

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貨號 FS-X10830
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RANA(Human rheumatoid arthritis associated nuclear artigen

產(chǎn)品介紹:

Crizotinib hydrochloride是一種有效的c-Met/ALK抑制劑,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中IC50分別為11nM,24nM

注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號:1415560-69-8

別名:PF-02341066 hydrochloride

純度:99.86%

分子量:486.8

儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

中文名稱:c-Met/ALK抑制劑

英文名稱:Crizotinib hydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg

貨號:FS-X10830

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

立枯絲核菌大鼠B淋巴瘤因子2Anti-OXR1 Antibody人β內(nèi)酰(β-lactamase)

污黑腐皮殼大鼠CXC趨化因子受體3Anti-ORC1 Antibody人β內(nèi)酰(β-lactamase)

棘孢小單孢菌小鼠腫瘤壞死因子βAnti-OSR2 Antibody人β甘露糖(β Manase)

Arenibacter sp.人食欲/阿立新BAnti-OVOL1 Antibody人β甘露糖(β Manase)

灰平鏈霉菌小鼠Ⅳ型膠原Anti-P2RY11 Antibody人β半乳糖(βGAL)

孢囊放線菌大鼠中性粒彈性蛋白Anti-P2RY13 Antibody人β半乳糖(βGAL)

立枯絲核菌人促睡眠肽Anti-P2RY4 Antibody人αL艾杜糖(IDUA)

PET-22b人6-羥多巴Anti-P2RY14 Antibody人αL艾杜糖(IDUA)

依利諾斯類芽胞桿菌小鼠己糖激Anti-P2RY8 Antibody人αL艾杜糖(IDUA)

枯草芽孢桿菌大鼠腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子Anti-P4HB Antibody人αL艾杜糖(IDUA)

宇佐美曲霉小鼠脫氫E1Anti-p90 RSK1 Antibody人α2抗纖溶(α2-AP)

新型隱球酵母原變種大鼠羥脯Anti-PACRG Antibody人α2抗纖溶(α2-AP)

金黃桿菌屬人心納Anti-PABPC5 Antibody人N-乙酰-β-D-基葡萄糖(NAG)

榛色假單胞菌小鼠糖原合成激Anti-PABPC3 Antibody人N-乙酰-β-D-基葡萄糖(NAG)

地衣芽胞桿菌大鼠骨保護(hù)配體Anti-PACS1 Antibody人L解(PAL)

小孢根霉華變種人神經(jīng)髓鞘蛋白Anti-PAK2 Antibody人L解(PAL)

RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體#牛肝菌屬人小氣道上皮細(xì)胞

Ras樣蛋白A抗體楊褐盤二孢多芽管轉(zhuǎn)化型人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基:(原代細(xì)胞)

Rh血型C抗原抗體松色二孢鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

環(huán)指蛋白11抗體盤多毛孢菌小鼠輔助性T細(xì)胞
c-Met/ALK抑制劑膠孢 肉湯培養(yǎng)基Dβ干擾

塞氏檸檬桿 增肉湯培養(yǎng)基E瘟病抗體

金色毛殼 瓊脂培養(yǎng)基F低密度脂蛋白

青霉 肉湯培養(yǎng)基G胰島

稻生黃單胞 瓊脂培養(yǎng)基H甲型肝炎1型病

大麗花輪枝孢(棉花黃萎?。?/span> 乳糖-雙岐桿鑒定漿膜炎抗體

飲料  胭脂紅、檸檬黃、日落黃  松三糖-雙岐桿鑒定禽呼腸孤病抗體

釀酒酵母 棉子糖-雙岐桿鑒定新城疫中強(qiáng)核

佛羅里達(dá)紅曲霉 山梨-雙岐桿鑒定白介4

產(chǎn)氣腸桿 N,N-二乙基-2-甲基-1,4-苯白介

浸麻類芽孢桿 2-氨基-5-吡啶Ⅱ型膠原

Pseudomonas defluvii 雙(4-溴苯基)分泌型球蛋白A

醋醅類芽孢桿 叔戊基苯含黃單氧化3

新月彎孢 3-乙?;溅霉?半胱合成

銹赤蠟黃鏈霉 (s)-(+)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯乙酰肌肽

 


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