細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：主動脈弓內(nèi)皮細胞    

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號：FS-01X9786

產(chǎn)品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

j鏈(Ig-j)ELISA試劑盒英文名稱：Human immunoglubin joining chain,Ig-j ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血紅蛋白β亞基(HB-β)ELISA試劑盒 英文名稱：Human β-subunits of hemoglobin,HB-β ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA試劑盒 英文名稱：Human secretory immunoglobulin A,SIgA ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T

人活化Ⅻ(FⅫa)ELISA試劑盒英文名稱：Human activated coagulation factor Ⅻ,FⅫa ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人異常原(APT)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Abnormal prothrombin,APT ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)ELISA試劑盒英文名稱：Human circulating immune complex,CIC ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血小板相關(guān)抗體IgM(PA-IgM)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Platelet associated antibody,PA-IgM ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血纖/纖維蛋白A(FPA)ELISA試劑盒 英文名稱：Human fibrinopeptide A,FPA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA試劑盒 英文名稱：Human cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4,CTLA-4 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

輕鏈lambda(λ-IgLC)ELISA試劑盒 英文名稱：Human lambda immunoglobulin light chain,λ-IgLC ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人-主要組織相容性復(fù)合體復(fù)合物(pMHC)ELISA試劑盒英文名稱：Human peptide major histocompatibility complex,pMHC ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人皮膚淋巴細胞相關(guān)抗原(CLA)ELISA試劑盒英文名稱：Human cutaneous lymphocyte-associated antigen,CLA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物(T-TM)ELISA試劑盒英文名稱：Human thrombinthrombomodulin compound,T-TM ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人溶血補體(Hc)ELISA試劑盒英文名稱：Human Hemolytic complement,Hc ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人T細胞受體(TCR)ELISA試劑盒英文名稱：Human T cell receptor,TCR ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人狼瘡抗凝抗體(LAC/LA)ELISA試劑盒英文名稱：Human lupus anticoagulant,LAC/LA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)ELISA試劑盒英文名稱：Human soluble fibrin monomer complex,SFMC ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)ELISA試劑盒英文名稱：Human 2,3-dinor thromboxane B2,2,3-dinor-TXB2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
主動脈弓內(nèi)皮細胞Caspase 5  半胱蛋白蛋白5抗體規(guī)格: 0.1ml

FEM1A  前列腺E受體4相關(guān)蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

LANPL  富含亮樣性核蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

MALT1  粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤轉(zhuǎn)運蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml

NALP12  NALP12抗體規(guī)格: 0.2ml

NALP6  富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體規(guī)格: 0.2ml

NLRP7  富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體規(guī)格: 0.2ml

NLRP9  富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。