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貨號(hào)	FS-X10760

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱(chēng)：CK2抑制劑(DMAT)

英文名稱(chēng)：DMAT

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10760

產(chǎn)品介紹:

DMAT是一種有效的，特異性的CK2抑制劑，IC50值為130nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：749234-11-5

別名：Casein kinase II Inhibitor;CK2 Inhibitor

純度：98.40%

分子量：476.79

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

香栓菌促甲狀腺釋放激Anti-H4C1 Antibody人PL7抗體/抗蘇酰tRNA合成(PL7)

耐久腸球菌Anti-HABP2 Antibody人PL7抗體/抗蘇酰tRNA合成(PL7)

豌豆根瘤菌甲狀腺T4偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-H4C1 Antibody人PL12抗體/抗酰tRNA合成(PL12/AlaRS)

雷蘑重組人腫瘤壞死因子Anti-H4C1 Antibody人PL12抗體/抗酰tRNA合成(PL12/AlaRS)

枇杷炭疽病菌端粒逆轉(zhuǎn)錄Anti-HAND1 Antibody人抗Mi2抗體(anti-Mi2-Ab)

大腸埃希菌抗菌肽Anti-HARS Antibody人抗Mi2抗體(anti-Mi2-Ab)

乳乳球菌乳亞種拓普西異構(gòu)Ⅰ抗原Anti-HAND1 Antibody人抗Ku抗體(anti-Ku-Ab)

根瘤菌轉(zhuǎn)鐵蛋白Anti-HAT1 Antibody人抗Ku抗體(anti-Ku-Ab)

Marisediminicola色羥化(多肽)Anti-HAO1 Antibody人抗IgA抗體(anti-IgA-Ab)

長(zhǎng)孢黃色鏈霉菌葡萄膜自身抗原UacaAnti-HAUS8 Antibody人抗IgA抗體(anti-IgA-Ab)

核盤(pán)菌黃熱病包膜糖蛋白Anti-HBP1 Antibody人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體(ANNA-1/Hu)

瓜枝孢（黃瓜黑星病菌）2，4-二氧乙偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-HCCS Antibody人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體(ANNA-1/Hu)

繩狀曲霉抗利尿激/血管升壓抗原（和肽）Anti-HAUSP(USP7) Antibody人抗DNAB抗體(anti-DNase B)

大腸埃希菌豬藍(lán)耳病病M蛋白Anti-HCAR3 Antibody人抗DNAB抗體(anti-DNase B)

蔗糖伯克霍爾德氏菌雞新城疫疫苗（雞瘟4型混合病）偶聯(lián)辣根過(guò)氧化物Anti-HCLS1 Antibody人抗BP180抗體(BP180-Ab)

醋化醋桿菌大鼠分泌型IgA(抗原)Anti-HCFC1 Antibody人抗BP180抗體(BP180-Ab)

細(xì)胞分化蛋白SEPT11抗體糙皮側(cè)耳、平菇人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞

晶狀體發(fā)育相關(guān)蛋白Six3抗體雪白根霉人肺癌細(xì)胞（干細(xì)胞庫(kù)保藏）

細(xì)胞分化蛋白SEPT14抗體爪哇根霉人侵襲性脈絡(luò)膜黑色瘤細(xì)胞

精結(jié)合蛋白2抗體戴爾根霉人膀胱癌細(xì)胞
CK2抑制劑(DMAT)蓮座革馬丁氏肉湯YY肽

根瘤鉻吡啶鎓胃泌抑制肽

枯草芽孢桿 NT培養(yǎng)基熱休克蛋白90

沙雷氏屬結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂(VRBGA)熱休克蛋白27

根霉 4-乙酰氧基苯乙烯短鏈脂肪

*黃溶鏈霉改良Frey添加劑絲狀支原體抗體

釀酒酵母萬(wàn)古霉0.66mg骨成型蛋白4

松口蘑幽門(mén)螺旋桿添加劑內(nèi)

灰紅鏈霉 4-溴丁色C氧化

金龜子綠僵 LAMVAB瓊脂酮脫氫

醋化醋桿 ISP培養(yǎng)基2狀腺原

孟氏假單胞無(wú)氮培養(yǎng)基促甲狀腺

植物乳桿 LESMF保存性培養(yǎng)基組

克羅諾桿屬厭氧肉肝湯培養(yǎng)基一氧化氮

銀色鏈霉 5-氟-2-甲基溴芐5羥色
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)