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貨號(hào)	FS-01S63493

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公司產(chǎn)品僅用于科研提供的生化試劑盒，質(zhì)量信得過(guò)產(chǎn)品，售后*。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位，竭誠(chéng)為您提供更周到的服務(wù)更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。

產(chǎn)品名稱：PEPC磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶微量法
規(guī)格：100管/96樣

檢測(cè)方法：微量法

貨號(hào)：FS-01S63493
商品介紹：

測(cè)定意義

PEPC（EC 4.1.1.31）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)胞中，是催化磷酸烯醇式丙酮酸與二氧化碳反應(yīng)生成草酰乙酸呈不可逆反應(yīng)的酶，對(duì)三羧酸循環(huán)的運(yùn)轉(zhuǎn)起重要調(diào)節(jié)作用。

測(cè)定原理：

PEPC催化磷酸烯醇式丙酮酸和CO2生成草酰乙酸和HPO42-，蘋(píng)果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋(píng)果酸和NAD+，在340nm測(cè)定NADH減少速率，計(jì)算PEPC活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)胞或組織樣品的制備：

培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

試劑的組成和配制：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
綿羊血小板衍生生長(zhǎng)因子亞基A(PDGFA)聯(lián)免疫試劑盒纖細(xì)屈曲海生Mouse ICAM-1 (intercellular adhesion molecule 1) ELISA Kit

綿羊X型膠原(COL10)聯(lián)免疫試劑盒毛束霉Mouse ICAM-2 (intercellular adhesion molecule 2) ELISA Kit

綿羊α(LTA)聯(lián)免疫試劑盒屎腸球Mouse ICAM-3 (intercellular adhesion molecule 3) ELISA Kit

綿羊線粒體肌激1B(CKMT1B)聯(lián)免疫試劑盒金針菇Mouse IFN-α (Interferon Alpha) ELISA Kit

綿羊髓分化因子88(MYD88)聯(lián)免疫試劑盒干酪乳桿Mouse FOXO1 (Forkhead Box Protein O1) ELISA Kit

綿羊蛋白激Bγ(PKBG)聯(lián)免疫試劑盒枯斑擬盤(pán)多毛孢M(jìn)ouse IFI16/p16 (Interferon-inducible Protein 16) ELISA Kit

綿羊凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)聯(lián)免疫試劑盒 Lactococcus sp.Mouse IFN-α-Ab (Interferon-α Antibody) ELISA Kit

綿羊粘附蛋白1(CYTH1)聯(lián)免疫試劑盒匍匐曲霉Mouse UCP-1 (Uncoupling Protein 1, Mitochondrial) ELISA Kit

綿羊膀胱腫瘤抗原(BTA)聯(lián)免疫試劑盒草青霉Mouse FIL1d (Interleukin 1 Delta) ELISA Kit

綿羊補(bǔ)體成分3a(C3a)聯(lián)免疫試劑盒 PseudarthrobacterMouse FIL1h (Interleukin 1 Eta) ELISA Kit

綿羊水通道蛋白3(AQP-3)聯(lián)免疫試劑盒糞纖維單胞Mouse IL-34 (Interleukin 34) ELISA Kit

綿羊破骨相關(guān)受體(OSCAR)聯(lián)免疫試劑盒腐皮殼Mouse IL-3 (Interleukin 3) ELISA Kit

綿羊IV型膠原(COL4)聯(lián)免疫試劑盒平菇新宇711Mouse IL-5 (Interleukin 5) ELISA Kit

綿羊組織型纖溶原激活因子(tPA)聯(lián)免疫試劑盒少根根霉Mouse IL-7 (Interleukin 7) ELISA Kit

綿羊蛋白二硫化物異構(gòu)A6(PDIA6)聯(lián)免疫試劑盒米曲霉Mouse IL-9 (Interleukin 9) ELISA Kit
PEPC磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶微量法溴代十四烷 98%聚氯乙烯 K-value 62-60 ED-1 (Ectodermal Dysplasia 1) 外胚層發(fā)育不良抗原

1-溴代正己烷 99%聚氯乙烯 K-value 59-55rhEGF(rh-Epidermal growth factor) 重組長(zhǎng)因子

溴代正丁烷 CP,98% AR,99.5%（劇品）EGF(Epidermal growth factor)rat 重組表皮生長(zhǎng)因子抗原(大鼠)

1-溴代正辛烷 98%三乙 CP,98.0%EGFL7(EGF-like domain containing protein 7) 類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子域7抗原

1-溴-3-氯烷 99%四氯乙烯 AR，98%Egr-1(Early growth response 1) 早期反應(yīng)基因-1/應(yīng)急反應(yīng)生長(zhǎng)基因1抗原

溴代異丁烷 98%間甲 GR,99%phospho-eIF4E(pSer209)(phospho-Eukaryotic translation initiation factor 4E) 磷化eIF-4E（Ser209）抗原

溴代叔丁烷, 包含0.5%碳穩(wěn)定劑, CP乙乙烯酯 99.0%ELK1 轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗原

溴代叔丁烷 >98.0%(GC)乙 98%Elastin 彈性蛋白抗原