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貨號	FS-X9545

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中caspase 9酶活性或純化的caspase 9酶活性的試劑盒。

Caspase是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 9也稱ICE-LAP6或Mch6，有時被寫作caspase-9或caspase 9，是細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中比較上游的一個caspase。線粒體釋放細胞色素以后，caspase 9可以和細胞色素以及Apaf1形成復(fù)合物，同時被激活。激活的caspase 9可以激活細胞凋亡的關(guān)鍵酶caspase 3，從而促進后續(xù)的細胞凋亡信號。Caspase 9的激活可以通過磷酸化進行調(diào)控。

本Caspase 9活性檢測試劑盒是基于caspase 9可以催化底物Ac-LEHD-pNA(acetyl-Leu-Glu-His-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline)，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 9的活性。pNA在405nm附近有強吸收。

試劑盒中提供了caspase 9催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA，可以作為定量caspase 9酶活性的標準品。

試劑盒組分：

裂解液——————8ml

檢測緩沖液——————8ml

Ac-LEHD-pNA(2mM)———200μl

pNA(10mM)——————200μl

儲存條件：-20℃

中文名稱：Caspase 9 活性檢測試劑盒

英文名稱：Caspase 9 Activity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20次|100次

貨號：FS-X9545

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

蛋白ATP1B4(ATP1B4)elisa檢測試劑盒英文名稱：ATP1B4 ELISA Kit，ATP1B4，

促胰液su(secretin)elisa檢測試劑盒英文名稱：secretin ELISA Kit，secretin，

巢蛋白1(NID1)elisa檢測試劑盒英文名稱：NID1 ELISA Kit，NID1，

補體3裂解產(chǎn)物(C3SP)elisa檢測試劑盒英文名稱：C3SP ELISA Kit，C3SP，

胞漿型磷脂meiA2(cPLA2)elisa檢測試劑盒英文名稱：cPLA2 ELISA Kit，cPLA2，

白介su2受體(IL-2R)elisa檢測試劑盒英文名稱：IL-2R ELISA Kit，IL-2R，

白介su10(IL-10)elisa檢測試劑盒英文名稱：IL-10 ELISA Kit，IL-10，

β葡糖mei(β-glucosidase)elisa檢測試劑盒英文名稱：β-glucosidase ELISA Kit，β-glucosidase，

可溶性腫瘤壞死因子α受體(sTNFαR)elisa檢測試劑盒英文名稱：sTNFαR ELISA Kit，sTNFαR，

人抗透明帶抗體(aZP)elisa檢測試劑盒英文名稱：aZP ELISA Kit，aZP，

顆粒溶su(GNLY)elisa檢測試劑盒英文名稱：GNLY ELISA Kit，GNLY，

人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原(RANA)elisa檢測試劑盒英文名稱：RANA ELISA Kit，RANA，

人抗蛋白mei3抗體IgG(PR3 Ab-IgG)elisa檢測試劑盒英文名稱：PR3 Ab-IgG ELISA Kit，PR3 Ab-IgG，

巨噬細胞刺激蛋白(MSP)elisa檢測試劑盒英文名稱：MSP ELISA Kit，MSP，

膠原meiII(Collagenase II)elisa檢測試劑盒英文名稱：Collagenase II ELISA Kit，Collagenase II，

集蛋白亞家族成員11(COLEC11)elisa檢測試劑盒英文名稱：COLEC11 ELISA Kit，COLEC11，

基質(zhì)金屬蛋白mei10(MMP-10)elisa檢測試劑盒英文名稱：MMP-10 ELISA Kit，MMP-10，
Caspase 9 活性檢測試劑盒伊曲康zuo標準品規(guī)格:100mg 英文名稱：Itraconazole

水飛薊提取物粉標準品規(guī)格:250mg 英文名稱：Powdered Milk Thistle Extract

順—二十二碳六烯suan乙酯標準品規(guī)格:500mg 英文名稱：

相關(guān)物質(zhì)D標準品規(guī)格:20mg 英文名稱：

美服培tong標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Mifepristone

奎寧tong標準品規(guī)格:50mg 英文名稱：Quininone

雙烯雌酚標準品規(guī)格:125mg 英文名稱：Dienestrol

貫葉連翹提取物標準品規(guī)格:600mg 英文名稱：

標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Ropivacaine

標準品規(guī)格:100mg 英文名稱：Lamotrigine

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