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貨號(hào)	FS-X10849

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：Syk抑制劑(PRT062607)

英文名稱：PRT062607 Hydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10849

產(chǎn)品介紹:

PRT062607 hydrochloride是一種有效的純化的Syk抑制劑，IC50為1-2nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1370261-97-4

別名：P505-15 Hydrochloride

純度：99.20%

分子量：429.91

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

惡臭假單胞菌大鼠糖原磷化同工MMAnti-PLA2G4C Antibody人血管生成4(ANG-4)

灰綠鏈霉菌小鼠水通道蛋白1Anti-PLA2G4E Antibody人血管生成4(ANG-4)

枯草芽孢桿菌人癌基因蛋白質(zhì)p190/bcr-ablAnti-PLA2G1B Antibody人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)

平滑假絲酵母人膀胱腫瘤抗原Anti-PLAGL1 Antibody人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)

鏈霉菌小鼠水通道蛋白0Anti-PLCG1 Antibody人熱休克因子1(HSF-1)

蘇云金芽胞桿菌大鼠糖原磷化同工BBAnti-PLA2G4D Antibody人熱休克因子1(HSF-1)

雞傷門氏菌小鼠水通道蛋白2Anti-PLCB3 Antibody人血管活性肽抑制劑(VPI)

釀酒酵母大鼠甲狀腺抗體Anti-PLD1 Antibody人血管活性肽抑制劑(VPI)

杉葉散斑殼(都不提供）人中期因子Anti-PLCG2 Antibody人心肌肌凝蛋白輕鏈1(CMLC-1)

間型假絲酵母大鼠抗促甲狀腺受體抗體Anti-PLCXD1 Antibody人心肌肌凝蛋白輕鏈1(CMLC-1)

突尼斯葉桿菌人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白Anti-PLD4 Antibody人缺血修飾白蛋白(IMA)

大豆慢生根瘤菌小鼠甲狀腺球蛋白Anti-PLEKHG4 Antibody人缺血修飾白蛋白(IMA)

康寧木霉小鼠抑制AAnti-PLGRKT Antibody人8-異構(gòu)前列腺F2α(8-epi-PGF2α)

鏈霉菌大鼠兒茶Anti-PLG Antibody人8-異構(gòu)前列腺F2α(8-epi-PGF2α)

彩色豆馬勃人B淋巴瘤因子2Anti-PLG Antibody人血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)

蚜蟲莫氏黑粉菌大鼠白介27Anti-PLK5 Antibody人血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)

粘液樣脂肪肉瘤蛋白FUS1抗體球毛殼霉腦膜炎奈瑟菌

血小板源性生長因子A相關(guān)蛋白2抗體平田頭菇-2人毛囊角質(zhì)細(xì)胞

腫瘤壞死因子配體超家族成員13抗體燕麥?zhǔn)染鞴蟻喎N大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元瘤細(xì)胞

T細(xì)胞白血病同源盒蛋白3抗體葡萄炭疽刺盤孢菌人白血病細(xì)胞耐藥株
Syk抑制劑(PRT062607)鹽反硝化枝芽孢桿 MiddleBrook7H瓊脂硫肝糖蛋白

匍匐曲霉原變種 MiddleBrook7H11瓊脂硫類肝

大豆慢生根瘤曲霉瓊脂基礎(chǔ)(AFPA)硫軟骨

青色鏈霉假單胞分離瓊脂

淡紫灰吸水鏈霉 knudson糜蛋白

釀酒酵母 TGE培養(yǎng)基球蛋白A

MMO-MUG培養(yǎng)基球蛋白E

葡萄牙棒孢酵母硫細(xì)培養(yǎng)基球蛋白G

假單胞屬 GVPC瓊脂基礎(chǔ)球蛋白G1

栗酒裂殖酵母霉培養(yǎng)基球蛋白G2

藤黃微球 ASS瓊脂球蛋白G2a

乳片球 AC肉湯球蛋白G2b

阿納托利亞正青霉細(xì)L型增液球蛋白G3

核盤細(xì)L型分離瓊脂球蛋白G4

平菇溶血瓊脂基礎(chǔ)球蛋白M
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)