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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> CDK廣譜抑制劑
| 貨號(hào) | FS-X10773 |
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中文名稱(chēng):CDK廣譜抑制劑
英文名稱(chēng):Flavopiridol Hydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10773
產(chǎn)品介紹:
Flavopiridol Hydrochloride是一種CDK的廣譜抑制劑,與ATP競(jìng)爭(zhēng)性地抑制CDK1,CDK2和CDK4的活性,IC50值分別為30,170,100nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):131740-09-5 別名:HL 275;NSC 649890;MDL 107826A;FLAVOPIRIDOL HCL;Alvocidib Hydrochloride 純度:98.95% 分子量:438.3 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
柴油食烷菌(親和純化) 牛IgGAnti-ISL2 Antibody人抗型肝炎病抗體(anti-HCV)
細(xì)麗外擔(dān)菌熒光標(biāo)記牛血清白蛋白Anti-ITGA2 Antibody人抗型肝炎病抗體(anti-HCV)
核盤(pán)菌羅丹明標(biāo)記牛血清白蛋白Anti-ITPKA Antibody人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)
Phaeobotryon羅丹明標(biāo)記狗IgMAnti-ITGAD Antibody人抗斑疹傷寒抗體(anti-typhus-Ab)
Microbacterium halotolerans熒光Cy3標(biāo)記狗IgMAnti-ITIH2 Antibody人單核增多性李斯特菌O((LLO)
釀酒酵母熒光PE標(biāo)記狗IgGAnti-ITPK1 Antibody人單核增多性李斯特菌O((LLO)
黑曲霉兔抗熒光Anti-ITPKC Antibody人乙型肝炎病X抗原(HBxAg)
巧克力糖霉菌羊IgGAnti-JAK2 Antibody人乙型肝炎病X抗原(HBxAg)
黃曲霉辣根過(guò)氧化物標(biāo)記羊抗人IgAAnti-ITPKB Antibody人腺相關(guān)病(AAV)
冠突曲霉熒光APC標(biāo)記羊IgG(流式同型對(duì)照)Anti-JAK1 Antibody人腺相關(guān)病(AAV)
鞘單胞菌(加詞待譯)羅丹明標(biāo)記Anti-JAK2 Antibody人乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)
無(wú)花果曲霉(免疫親和純化)人IgMAnti-JAKMIP2 Antibody人乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)
枯草芽孢桿菌兔抗HRPAnti-JAK3 Antibody人傷寒抗原(St-Ag)
秀珍菇(親和純化) 人IgGAnti-JAK2 Antibody人傷寒抗原(St-Ag)
短小芽孢桿菌(親和純化) 人分泌型IgAAnti-JAM A pY280 Antibody人類(lèi)嗜T淋巴Ⅰ型病(HTLV-Ⅰ)
釀酒酵母生物化人IgGAnti-JMJD5 Antibody 人類(lèi)嗜T淋巴Ⅰ型病(HTLV-Ⅰ)
環(huán)指蛋白40抗體匍匐放射毛霉或雅致放射毛霉HCMEC人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞
環(huán)指蛋白8抗體李克犁頭霉(傘枝梨頭霉)人急性早幼粒白血病細(xì)胞
細(xì)胞衰老抑制基因蛋白抗體皮狀絲孢酵母大鼠垂體瘤細(xì)胞
中間絲相關(guān)蛋白抗體貝雷絲孢酵母人急性髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞
CDK廣譜抑制劑肉色栓 半固體營(yíng)養(yǎng)瓊脂低氧誘導(dǎo)因子-1α
擬莖點(diǎn)霉屬 麥芽汁培養(yǎng)基對(duì)氧磷1
冬蟲(chóng)夏草 雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基多巴
莓實(shí)假單胞 遠(yuǎn)藤氏瓊脂二氧化
豬丹絲 月桂基硫鹽蛋白胨肉湯-MUG肥大類(lèi)胰蛋白
松杉靈芝 MFC肉湯肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A
枯草芽孢桿 馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B
根瘤 馬鈴薯葡萄糖水肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C
松鼠葡萄球 綜合馬鈴薯培養(yǎng)基肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D
曲霉 胰酪胨大豆多粘肉湯基礎(chǔ)分泌型球蛋白A
綠色木霉 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基(SDB)鈣蛋白
草假單胞 CIN培養(yǎng)基鈣調(diào)磷調(diào)節(jié)蛋白1
黑曲霉 波爾頓選擇性肉湯甘油三酯
貓埃菲比體 紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基肝化血漿總脂解
德?tīng)柌加墟呓湍?/span> 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液肝結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子
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