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貨號	FS-X9531

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒，比普通的CCK-8試劑盒具有更好的檢測靈敏度和更寬的線性范圍。

WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan(參考圖1)。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

WST-8是MTT的一種升級替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點。首先，MTT被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實驗結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。

WST-8和WST-1相比，檢測靈敏度更高，更易溶解，并且更加穩(wěn)定。

本試劑盒可以用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測，或一些藥物誘導的細胞生長抑制檢測。

本試劑盒檢測非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的增強型CCK-8溶液，無須再進行任何配制等操作。無須使用同位素，所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細胞，不必收集細胞，也不必采用額外的步驟去溶解formazan?？梢杂糜诖笈繕悠返臋z測。酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。

WST-8對細胞無明顯毒性。加入增強型CCK-8溶液顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標儀讀板，使檢測時間更加靈活，便于找到佳測定時間。

中文名稱：增強型CCK-8試劑盒

英文名稱：Enhanced Cell Counting Kit-8

產(chǎn)品規(guī)格：100次|500次|2500次|10000次

貨號：FS-X9531

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

甘氨酰tRNA合成酶(GARS)檢測試劑盒 forGlycyltRNASynthetase(GARS)

鈣黏蛋白22(CDH22)檢測試劑盒 forCadherin22(CDH22)

細胞色(CYCS)檢測試劑盒 forCytochromeC,Somatic(CYCS)

膽綠素還原酶A(BLVRA)檢測試劑盒 forBiliverdinReductaseA(BLVRA)

Neurensin1蛋白(NRSN1)檢測試劑盒 forNeurensin1(NRSN1)

克拉拉細胞蛋白16(CC16)檢測試劑盒 forClaraCellProtein16(CC16)

視網(wǎng)膜鈣黏附蛋白(RCAD)檢測試劑盒 forCadherin,Retinal(RCAD)

轉(zhuǎn)化受體電位陽離子通道亞家族V成員2(TRPV2)檢測試劑盒 forTransientReceptorPotentialCationChannelSubfamilyV,Member2(TRPV2)

芳香烴受體(AhR)檢測試劑盒 forArylHydrocarbonReceptor(AhR)

布皮質(zhì)素3(BEST3)檢測試劑盒 forBestrophin3(BEST3)

酶Ⅰ(CA1)檢測試劑盒 forCarbonicAnhydraseI(CA1)

絲切蛋白2(CFL2)檢測試劑盒 forCofilin2,Muscle(CFL2)

干擾素β(IFNβ)檢測試劑盒 forInterferonBeta(IFNb)

前列腺素E受體2(EP2)檢測試劑盒 forProstaglandinEReceptor2(EP2)

組蛋白H2B(H2B)檢測試劑盒 forHistoneH2B(H2B)

25kDa突觸關(guān)聯(lián)蛋白(SNAP25)檢測試劑盒 forSynaptosomalAssociatedProtein25kDa(SNAP25)

骨橋素(OPN)檢測試劑盒 forOsteopontin(OPN)
增強型CCK-8試劑盒磷妥英鈉標準品規(guī)格:250mg 英文名稱：Fosphenytoin Sodium

氟烷相關(guān)物質(zhì)C標準品規(guī)格:0．2ml 英文名稱：

卡維地相關(guān)物質(zhì)B標準品規(guī)格:15mg 英文名稱：

孢地尼標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Cefdinir

牡荊樹提取物標準品規(guī)格:1．5g 英文名稱：Powdered Chaste Tree Extract

尼替丁相關(guān)物質(zhì)A標準品規(guī)格:50mg 英文名稱：

萘標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Naphthalene

度西汀雜質(zhì)A標準品規(guī)格:10mg 英文名稱：

扁桃酸標準品規(guī)格:500mg 英文名稱：Mandelic Acid (AS)

羧甲基淀粉鈉標準品（A型）規(guī)格:400mg 英文名稱：Sodium Starch Glycolate Type A

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