當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T犬瘟熱病毒(CDV)核酸定性檢測試劑盒
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:犬瘟熱病毒(CDV)核酸定性檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P10661
產(chǎn)品分類:RT-PCR 法
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點:
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
解脂耶羅威亞酵母共生微生物/魚類共生菌模式菌株: no生物樣/未知魚8 消化道提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 513生長條件: 28℃
-1012℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
鏈霉菌 -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法生長條件: 28℃提供形式: 凍干物模式菌株: no培養(yǎng)基: 38
擬莖點霉培養(yǎng)基: 14模式菌株: no葉子提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25 -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;定期移植法
密叢毛霉培養(yǎng)基: 0014模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
短小桿菌近海細菌模式菌株: no水樣/表層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃
華麗黃鏈霉菌抗金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌11、草分枝桿菌、腸球菌模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C
鏈霉菌屬培養(yǎng)基: CM0015產(chǎn)生茴香霉素提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28C 真空冷凍干燥
-1013℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
惡臭醋桿菌混濁變種培養(yǎng)基: CM0001產(chǎn)醋。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28℃ 真空冷凍干燥法;定期移植法
陰溝腸桿菌培養(yǎng)基: 33模式菌株: no土樣提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他
涅斯特連科氏菌培養(yǎng)基: 145分類學、及鹽堿微生物的研究土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;其他
枝頂孢屬(斜面)培養(yǎng)基: 綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,硫鎂 1.5g,葡萄糖 20g,維生素B1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。馬鈴薯煮液:200g馬鈴薯,去皮,切塊,放入蒸餾水中煮沸30min,取濾液定容至1000mL,備用。121℃,15min。模式菌株: no武靈大棗提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25-28℃,好氧 定期移植法
高加索鏈霉菌培養(yǎng)基: 0012模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
細黃鏈霉菌培養(yǎng)基: 0012模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
-1014℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
3-酞酐
2-乙氧基
2-[4-(2-基)芐基]-羧叔丁酯
化亞銅
2-Ethylhexyl methacrylate 甲基丙烯異辛酯 688-84-6
Hexyl methacrylate 甲基丙烯己酯 142-09-6
Carbon disulphide 二硫化碳 75-15-0
4-Chlorophenyl isocyanate 對異酯 104-12-1
大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血管內(nèi)皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)免疫試劑盒 Human VCAM-1 ELISA kit
人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒 ,英文名: PM-Scl/PM-1 ELISA Kit
RatIerleukin3,IL-3ELISA試劑盒大鼠白介素3(IL-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
humanglamicaciddecarboxylaseaoaibody,GAD-AbELISA試劑盒人谷氨脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInvolucrin,iNVELISAKit人套膜蛋白(iNV)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
犬瘟熱病毒(CDV)核酸定性檢測試劑盒七葉皂苷D219944-46-4中文別名:七葉皂甙D
英文名:AescinIIB
英文別名:ESCIN IIB
登錄號:219944-46-4
分子式:C55H86O24
分子量:1131.26
分子結(jié)構(gòu):
外觀:白色粉末
規(guī)格:20 mg/支
純度:> 95%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源:七葉樹科七葉樹屬植物七葉樹(Aesculus chinensis Bge)的果實
溶解性:在水和中易溶,在乙醇和丁醇中溶解,在和乙中不溶。
藥理藥效:具有一定消炎、抗?jié)B出、提高靜脈張力、改善微循環(huán)的作用。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。
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