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人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;TE671 Subline No.2
| 貨號(hào) | AXB6494 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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產(chǎn)品名稱(chēng) | NCI-H1694人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 | 貨號(hào) | AXB6494 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | NCI-H1694 |
分類(lèi) | 人細(xì)胞系 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類(lèi)或動(dòng)物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。

細(xì)胞凍存注意事項(xiàng):
(1) 細(xì)胞的收獲
用來(lái)凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿(mǎn) 90% 的時(shí)候,這時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好,細(xì)胞數(shù)量也多,并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來(lái)凍存的細(xì)胞開(kāi)始時(shí)方法和平時(shí)一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸,活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬(wàn) 細(xì)胞 /ml ),加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對(duì)特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會(huì)好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過(guò)度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō),每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí),再放入 -80℃冰箱過(guò)夜(如果沒(méi)有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長(zhǎng)期保存。
(4) 儲(chǔ)存環(huán)境
細(xì)胞長(zhǎng)期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲(chǔ)少量液氮,需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。

公司正在出售的產(chǎn)品:
Ai-CD31/FITC 熒光素標(biāo)記血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-Phospho-HSL (Ser660)/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh CD8B CD8β鏈(CD8-β)抗體 規(guī)格 0.1ml
Pepsinogen C peptide 原C蛋白抗原 0.5mg
phospho-IKK beta(Ser466) 英文名稱(chēng): 0酸化KB抑制蛋白激酶β抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh TBX2/T-box2 血栓素B2抗體(一種新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因) 規(guī)格 0.2ml
Ai-Phospho-HSL (Ser660)/FITC 熒光素標(biāo)記0酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-Phospho-BLNK(p-Tyr96) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人0酸化T淋巴細(xì)胞連接蛋白抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-GPR30/FITC 熒光素標(biāo)記G蛋白偶聯(lián)受體30抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh CK II Alpha/STK 絲/蘇蛋白質(zhì)激酶抗體Casein kinase Ⅱα(CKⅡα) 規(guī)格 0.1ml
CD147/EMMPRIN(Extracellular matrix metalloproteinase inducer) CD147(抗原) 0.5mg
phospho-IKK beta(S474) 英文名稱(chēng): 0酸化KB抑制蛋白激酶β抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh TPA/PLAT 組織型纖溶酶原激活劑抗體 規(guī)格 0.1ml
Ai-GPR30/FITC 熒光素標(biāo)記G蛋白偶聯(lián)受體30抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-CD45RO/FITC 熒光素標(biāo)記CD45RO抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-ICAD/FITC 熒光素標(biāo)記Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶抑制劑抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh CD66a/CEACAM1 癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子1抗體 規(guī)格 0.2ml
PAFR/PTAFR 血小板活化因子受體抗原 0.5mg
Phospho-IKK alpha/beta (Ser176 + Ser180) 英文名稱(chēng): 0酸化KB抑制蛋白激酶α/β抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh Tal1 T細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞性白血病1蛋白/淋巴瘤蛋白5抗體 規(guī)格 0.2ml
Ai-ICAD/FITC 熒光素標(biāo)記Caspase 激活的脫氧核糖核酸酶抑制劑抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-CD46/MCP /FITC 熒光素標(biāo)記膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗體(人)IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Ai-ICAM-1(CD54)/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞間粘附分子-1抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
NCI-H1694人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞Rhesus aibody Rh CD64/IGFR1 免疫球蛋白G Fc段受體I 規(guī)格 0.1ml
PALB2(partner and locaizer of BRCA2) 癌易感基因相關(guān)蛋白2 0.5mg
Phospho-IKK alpha(Ser180) + IKK beta(Ser181) 英文名稱(chēng): 0酸化KB抑制蛋白激酶α/β抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh TAK1/MAP3K7 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β活化激酶1 規(guī)格 0.1ml
Ai-ICAM-1(CD54)/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞間粘附分子-1抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng):取6cm細(xì)胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液,37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,密度過(guò)大,轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)
A液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備:用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染:把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時(shí),吸除無(wú)血清轉(zhuǎn)染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后,可在48h-72h細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)之后,提取細(xì)胞蛋白或者RNA,驗(yàn)證敲減/過(guò)表達(dá)效率。
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