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貨號	FS-X10235

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測試劑盒

英文名稱：Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100T

貨號：FS-X10235

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100T

形態(tài)學(xué)檢測是研究細(xì)胞凋亡的基本方法。細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化是多階段的，起初，細(xì)胞間連接和微絨毛消失，細(xì)胞體積縮小，胞漿凝縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變疏松并與胞膜融合，形成一個個空泡，核糖體與線粒體等細(xì)胞器聚集，結(jié)構(gòu)尚無明顯改變，細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)逐漸凝聚成新月狀附在核膜周邊，細(xì)胞核固縮呈均一的致密物，進而斷裂成碎塊，此時細(xì)胞膜仍保持完整：然后，胞膜及核膜不斷出芽、脫落，一個細(xì)胞變成數(shù)個大小不等的有膜包裹的凋亡小體：后凋亡小體被周圍具有吞噬能力的細(xì)胞吞噬、消化。上述這些形態(tài)學(xué)的變化，可以通過本試劑盒中的染色及光學(xué)顯微鏡觀察。

計算細(xì)胞凋亡率和死亡率：

細(xì)胞凋亡率=凋亡細(xì)胞/細(xì)胞總數(shù)×100%

細(xì)胞死亡率=壞死細(xì)胞/細(xì)胞總數(shù)×100%

儲存：RT,避光，有效期12個月。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

擬卵蓋鵝膏菌高密度脂蛋白抗體Human SOCS6 大鼠白抗原DR(HLA-DR)免疫試劑盒

釀酒酵母蛋白激底物相關(guān)蛋白抗體Human AQPEP(Aminopeptidase Q) 大鼠白活化黏附因子(ALCAM)免疫試劑盒

芽孢桿菌艾滋病病抗體Human SODD/BAG4 大鼠白三烯E4(LTE4)免疫試劑盒

大腸埃希氏桿菌流感病H3N2血凝抗體Human SNX19 大鼠白三烯D4(LTD4)免疫試劑盒

葉生布勒擔(dān)子酵母人瘤病16型L2抗體Human Sodium iodide symporter 大鼠白三烯C4(LTC4)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌A型病H7N9 M1蛋白抗體Human SNX20 大鼠白三烯B4(LTB4)免疫試劑盒

Ensifer adhaerens水蛭抗體Human SNRPB 大鼠白介9(IL-9)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌副腫瘤綜合癥小腦變性相關(guān)蛋白抗體Human SNX22 大鼠白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒

唐菖蒲伯克霍爾德氏菌植物熱休克蛋白93抗體Human SNRPD1 大鼠白介7受體(IL-7R)免疫試劑盒

膠孢重組人瘤病抗體Human SNX25 大鼠白介7(IL-7)免疫試劑盒

宛氏擬青霉長鏈烯脂酰脫氫抗體Human SNRPD3 大鼠白介6受體(IL-6R)免疫試劑盒

釀酒酵母羥脫氫β抗體Human SLC25A6(ADP/ATP translocase 3) 大鼠白介6(IL-6)免疫試劑盒

枯草芽胞桿菌三羥基基裂解抗體Human SNX6 大鼠白介5(IL-5)免疫試劑盒

釀酒酵母高密度脂蛋白抗體Human SNUPN 大鼠白介4(IL-4)免疫試劑盒

串珠鐮孢*磷化三羥基基還原抗體Human SNW1 大鼠白介35(IL-35)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌羥基類固脫氫3α抗體Human SNX17 大鼠白介33(IL-33)免疫試劑盒

脆弱鏈霉菌Streptomyces│fragilis 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析,>99.0%(GC)N-基野靛堿

: SK520/61資源名稱: 彭納茲沙門氏菌質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)環(huán)氧澤瀉烯

鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%白蠟樹
細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測試劑盒大腸埃希氏 2,4,5-三氟苯鳥脫羧1

粉紅擲孢酵母 2,5-二氟苯3-甲

短乳桿* 異肌黃酮

芳香鐮孢 3-(4-氟苯甲酰)7a-羥化

清酒假絲酵母 1,4-苯并二烷-2-羧氧化型膽固

大腸埃希氏○抗原微量凝集定型血清診斷液 ○7 五氟甲酯已糖激2

Marisediminicola 1,4-丁二磺二鈉鹽已糖激3

硬結(jié)節(jié)桿 1,1-二乙基己烷α-烯化

栗疫 2,3-二氟苯二磷甘油變位

運動節(jié)桿 3,5-二甲氧基苯基頻那酯張力蛋白4

肉色香蘑月桂亞氨基二二鈉張力蛋白3

黑曲霉變種 2-溴咔唑突觸回蛋白2

釀酒酵母 (2S,4S)-N-Boc-4-甲基吡咯烷-2-甲酮脫氫激1

水稻節(jié)桿三乙二-二(3-叔丁基-4-羥基-5-基)酯磷肌依賴性蛋白激1

彎孢 N-(3-基)二丁基孕烯酮
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)