商品介紹：

細(xì)胞凍存注意事項：
(1)  細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時候，這時細(xì)胞生長狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時方法和平時一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸，活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2)  保護劑的使用
細(xì)胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護劑。在細(xì)胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3)  細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對大多數(shù)細(xì)胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個小時，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4)  儲存環(huán)境
細(xì)胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進入凍存管而在拿出細(xì)胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。

公司正在出售的產(chǎn)品：

AF488標(biāo)記人CD107a單克隆抗體  堿性螺旋環(huán)螺旋蛋白MESP2抗體　英文名；MESP2

AF647標(biāo)記的轉(zhuǎn)錄因子Pax6抗體  膠原樣蛋白抗體　英文名；COL20A1

AF680標(biāo)記的白細(xì)胞共同抗原CD45抗體  角質(zhì)蛋白β抗體　英文名；SPRR3

11號染色體開放閱讀框57抗體  核因子活化T細(xì)胞胞漿蛋白2抗體　英文名；NFAT1

14-3-3 sigma抗體  黑色素聚集激素/黑色素富集激素MCH抗體　英文名；PMCH

16號染色體開放閱讀框61抗體  黑色素瘤相關(guān)抗原C2抗體　英文名；MAGEC2

19號染色體開放閱讀框22抗體  環(huán)指蛋白207抗體　英文名；RNF207

19號染色體開放閱讀框80抗體  環(huán)指蛋白5抗體　英文名；RING5

1號染色體開放閱讀框159抗體  黃素蛋白氧化還原酶MICAL2抗體　英文名；MICAL2

1號染色體開放閱讀框222抗體  活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體　英文名；ATF1

1號染色體開放閱讀框86抗體  肌動蛋白交聯(lián)蛋白家族7抗體　英文名；MACF1/ACF7

HS578T人乳腺癌細(xì)胞20號染色體開放閱讀框160抗體  肌動蛋白相關(guān)蛋白M1抗體　英文名；ARPM1

21號染色體開放閱讀框13抗體  肌球蛋白15A抗體　英文名；MYO15A

鋅指蛋白143抗體  小鼠抗表皮生長因子樣激素受體1（EMR1）單克隆抗體　英文名；ADGRE1 (F4/80)

操作步驟:

(1) 細(xì)胞系培養(yǎng)：取6cm細(xì)胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量)

A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。

B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。

分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。

(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。

(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。

(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細(xì)胞長滿之后，提取細(xì)胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達(dá)效率。