>> 流動相的作用
流動相具有運載樣品分子的作用。
流動相還具有選擇性分離的作用。
當固定相一定時，流動相的種類、配比和流動速度都嚴重影響分離效果。
>> 流動相的種類
液相色譜所用流動相根據分析目的可分為單一或混合流動相。
混合流動相還可分為比例固定和比例可變流動相。
梯度洗脫就是使用比例可變流動相。
>> 流動相使用的注意事項
流動相的級別
流動相的處理
——過濾和脫氣
流動相的置換
>> 流動相的級別-水
水是見的極性溶劑
HPLC用水的要求：純化水（重蒸水）


因為不純物的存在，去離子水的吸光率較高。

純化水中去除了無機和有機的污染物，因此吸光率降低。
>> 流動相的級別-有機試劑
采用“HPLC”級溶劑

溶劑級別
–HPLC級
–優(yōu)級純
–分析純
1、都經過蒸餾和0.45um濾膜的過濾(除纖維毛、未溶解的機械顆粒等）。

2、優(yōu)級純的純度比分析純大,但里面含有極微量的防腐劑和抗氧化劑，這些添加劑往往有紫外吸收。

3、HPLC級經過0.2um濾膜的過濾,且除去有紫外吸收的雜質。
>> 分析純級和HPLC級溶劑的吸光度比較圖


>> 流動相的處理——過濾
•使用0.45um或更小孔徑濾膜過濾，注意濾膜的種類。
•目的：除去溶劑中的微小顆粒，避免堵塞管路和色譜柱，尤其是使用無機鹽配制的緩沖液時。
>> 濾膜類型

1、聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽。
2、醋酸纖維濾膜：不適用于有機溶劑，特別適用于水基溶劑。
3、尼龍66濾膜：適用于絕大多數有機溶劑和水溶液，可以用于強酸，不適用于二甲基甲酰胺。
4、再生纖維素濾膜：蛋白吸收低，同樣適用于水溶性樣品和有機溶劑。
>> 過濾的注意事項
•不同的試劑分別過濾，過濾后再混合。
•注意濾膜的選擇，不要混用。
•要現用現處理，尤其是水和緩沖液。
•要注意操作過程中的防塵。
•試樣也必須過濾，可用一次性針頭式過濾器。

>> 流動相的處理——脫氣
•目的：除去流動相中溶解或因混合而產生的氣泡。
•使用梯度洗脫時要有在線脫氣裝置。
•氣泡對測定的影響：
1、造成壓力波動，影響保留時間。
2、色譜柱中的氣泡會造成峰變形。
3、檢測池中的氣泡會造成基線波動。
>> 脫氣的方法
•1、超聲波振蕩脫氣
•2、氦氣置換清除法
•3、使用樹脂膜的減壓脫氣法
•應根據實際的使用情況選擇合適的脫氣方法。單動相或配合好的混合流動相可以采用超聲振蕩脫氣，梯度洗脫使用在線減壓脫氣。
>> 氦氣置換清除法


>> 使用樹脂膜的減壓脫氣法

>> 流動相的置換
•極性相似的試劑可以直接置換。
•極性不同的試劑，應用中間試劑作過渡。
例如：甲醇置換為正己烷時，可以考慮選擇異丙醇作為中間試劑。
•緩沖液的置換應先用水沖洗，再用有機試劑置換水。直接使用有機試劑會造成鹽的結晶，堵塞管路和色譜柱。