分光光度計(jì)是一種廣泛使用的光學(xué)式分析儀器，為保證這種分析儀器的準(zhǔn)確可靠，國家技術(shù)將其列為強(qiáng)檢儀器，并先后頒布了各類分光光度計(jì)的檢定規(guī)程。為了配合檢定規(guī)程的實(shí)施，近年來各醫(yī)學(xué)計(jì)量機(jī)構(gòu)都相繼配備了標(biāo)準(zhǔn)濾光片用于各類分光光度計(jì)的檢定。但是，由于分光光度計(jì)的種類繁多，各種分光光度計(jì)其適用的檢定規(guī)程及標(biāo)準(zhǔn)術(shù)光片也不盡相同，因此在具體檢定過程中，部分計(jì)量人員往往感到難以開展或不能完成某臺(tái)機(jī)器檢定的全過程。下面就幾種主要標(biāo)準(zhǔn)濾光片在分光光度計(jì)檢定中的應(yīng)用方法作一介紹。
1、鐠釹濾光片和氧化鈥濾光片
鐠釹濾光片和氧化鈥濾光片是一種具有特征吸收峰(或透射峰)的波長標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其吸收峰多而穩(wěn)定，波長范圍分別是: 400~900nm(鐠釹濾光片)、200~700nm (氧化鈥濾光片)，主要用于檢定紫外、可見分光光度計(jì)的波長準(zhǔn)確度與波長重復(fù)性，特別適用于具有自動(dòng)掃描功能的分光光度計(jì)上述兩項(xiàng)指標(biāo)的檢定。
其檢定方法是:①接通被檢儀器電源,預(yù)熱30分鐘；②設(shè)置儀器參數(shù)：置儀器于波長掃描方式，帶寬為2.0nm、響應(yīng)速度“中"、數(shù)據(jù)方式為“吸光度"、波長范圍為200nm~900nm;③不放任何樣品對(duì)儀器進(jìn)行99%基線校正;④將濾光片垂直放入樣品架，以空氣為參比進(jìn)行波長掃描，測(cè)出吸收光譜;⑤利用儀器的數(shù)據(jù)處理功能找出濾光片的吸收峰值波長，根據(jù)規(guī)程要求在紫外光區(qū)內(nèi)選1個(gè)峰值點(diǎn)，可見光區(qū)內(nèi)選3個(gè)峰值點(diǎn),連續(xù)測(cè)定3次。
對(duì)于不具有自動(dòng)掃描功能的儀器，在檢定時(shí)也要先對(duì)儀器進(jìn)行預(yù)熱、校正，采用逐點(diǎn)測(cè)試法測(cè)定吸收峰值。手動(dòng)掃描找點(diǎn)往往難以掌握,必須在吸收點(diǎn)上下反復(fù)多次才能確定。
2、雜散光濾光片
雜散光是指射到儀器探測(cè)器上的與測(cè)試波長不同的其它波長的光,是分光光度計(jì)的重要誤差來源之一,因此雜散光也是分光光度計(jì)的一項(xiàng)重要技術(shù)指標(biāo)。此組濾光片共有4塊,編號(hào)為：065-22、065- 38、065- 42、065一70,分別對(duì)應(yīng)220nm、380nm、 420nm、700nm.其在對(duì)應(yīng)的波長處的透射比等于零。所以選用某一雜散光濾光片所測(cè)定的被檢儀器的透射比值,即為該儀器在測(cè)試波長下的雜散光。
檢定規(guī)程對(duì)不同的分光光度計(jì)的雜散光測(cè)定規(guī)定了相應(yīng)的測(cè)試波長，紫外可見分光光度計(jì)的測(cè)試波長為220nm和 380nm，棱鏡式可見分光光度計(jì)的測(cè)試波長為420nm和700nm，光柵式可見分光光度計(jì)的測(cè)試波長為380nm，因此在檢定時(shí)必須根據(jù)不同的儀器選用合適的濾光片。具體方法是:①使被檢儀器通電并預(yù)熱30分鐘;②設(shè)定儀器參數(shù)于光度測(cè)量方式、帶寬為2.0nm ;③按要求設(shè)定波長,校正99%基線;④選合適的濾光片放入樣品架,以空氣為參比一次測(cè)定,其透射比讀數(shù)即為被檢儀器在測(cè)試波長下的雜散光。
以上就幾種主要標(biāo)準(zhǔn)濾光片對(duì)分光光度計(jì)的波長準(zhǔn)確度、波長重復(fù)性、透射比正確度、透射比重復(fù)性、雜散光等5個(gè)重要技術(shù)指標(biāo)的檢定操作方法作了全面系統(tǒng)的介紹。并結(jié)合檢定規(guī)程就測(cè)量數(shù)據(jù)的處理做了必要的說明,以方便出具《檢定證書》。不同類型的分光光度計(jì),均可根據(jù)相應(yīng)的檢定規(guī)程在進(jìn)行以上5個(gè)重要指標(biāo)檢定時(shí)適用此方法。
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