寧波洛尚智能科技有限公司
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閱讀：55發(fā)布時間：2026-2-23
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5):氯仿:異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的氯仿:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)抽提兩次,氯仿:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
紫外交聯(lián)儀技術(shù)優(yōu)勢
1. 能有效的處理土壤樣品中一些很難處理的組分如: 真細菌孢子(eubacterial spores)、內(nèi)芽孢(endospores)、格蘭仕陽性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、線蟲(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 樣品處理過程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整個提取過程中有效的保護核酸,并wu限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的純化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 純化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后續(xù)實驗之中。
5. 對腐植酸含量特別高的樣品,附加額外的處理方法。
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