一． 原理
凱氏法測(cè)定樣品中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機(jī)物，使含氮物轉(zhuǎn)化成硫酸銨。加入強(qiáng)堿進(jìn)行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測(cè)出氮含量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)6.25，計(jì)算出粗蛋白含量。
二． 試劑
1) 硫酸：化學(xué)純，含量為98%，無(wú)氮。
2) 混合催化劑：1g硫酸銅，9g硫酸鉀，均為化學(xué)純，磨碎混勻。
3) *：化學(xué)純，40%水溶液（m/v）。5%水溶液（m/v）
4) 硼酸：化學(xué)純，2%水溶液（m/v）。
5) 混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個(gè)月。
6) 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：c(HC1)=0.1mol/L。8.3ml鹽酸（分析純），注入1000ml蒸餾水中。
7) 硼酸吸收液：2%硼酸溶液（20 g/L）：稱取100 g硼酸，加水溶解后并稀釋至5000 mL。加入（1：3.5混合指示劑6ML）搖勻，再加入5%的*稀釋溶液0.35ML搖勻，顏色呈紫紅色。
三． 儀器設(shè)備
1) 實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎劑或研缽
2) 分樣篩：40目（孔徑0.45mm）
3) 分析天平：感量0.0001g
4) 消化爐（SKD-08S2）
5) 容量瓶100ml
6) 滴定管：10、25ml
7) 消化管：300ml
8) 定氮儀(SKD-2000)
四． 樣品的選取和制備
樣品粉碎后全部通過(guò)40目篩，裝于密封容器中，防止樣品成分的變化。
五． 分析步驟
1 樣品的消化
稱取樣品0.5~1g(含氮量5~80mg)準(zhǔn)確至0.0002g，放入消化管中，加入5g混合催化劑，與樣品混合均勻，再加入10ml硫酸，將消化管置于消化爐上加熱，直至呈透明的藍(lán)綠色，然后在繼續(xù)加熱，至少30分鐘。
2 SKD-08S2消化爐
操作（6個(gè)樣品和2個(gè)空白）
按"SET"鍵+“A/M"鍵3秒，跳出**設(shè)置區(qū)程序參數(shù)修改界面。連續(xù)按“SET"鍵數(shù)次出來(lái)
檢查“RUN"=“3"，pro= “ 1 " ，再設(shè)置r1 =200，T1=5分鐘，c1=180度，r2=180，T2=5,C2=250度，r3=180， T3=5, C3=350度，r4=200，T4=60，c4=410，r5=0，T5=0,C5=0度。。。。r32=0,t32=0,c32=0,設(shè)置好后等幾秒鐘，程序會(huì)自動(dòng)保存。
再打開啟動(dòng)開關(guān)（綠開關(guān)）-----------程序自動(dòng)運(yùn)行，自動(dòng)結(jié)束。如果出現(xiàn)不運(yùn)行，再檢查“RUN"設(shè)置為“3"，pro= “ 1 " 。
程序段 | R：斜率（min/℃） | T：保溫時(shí)間 | C：目標(biāo)溫度 |
1 | 200 | 5 | 180 |
2 | 180 | 5 | 250 |
3 | 180 | 5 | 350 |
4 | 200 | 60 | 410 |
3 SKD-2000全自動(dòng)定氮儀
樣品消化好后，冷卻至室溫。
蒸餾設(shè)置：堿45ml，稀釋液40ml，標(biāo)準(zhǔn)酸0.0953（mo/l），蒸餾功率99%，蒸餾時(shí)間6分鐘，硼酸儀器自動(dòng)加。
測(cè)定結(jié)果
編號(hào) | 樣品重量g | 空白（ul） | 標(biāo)準(zhǔn)酸濃度mo/l | 樣品消耗量ml | 蛋白含量% |
1 | 0.9627 | 65 | 0.0953 | 14.883 | 12.8437 |
2 | 0.8475 | 65 | 0.0953 | 13.102 | 12.8362 |
3 | 0.8428 | 65 | 0.0953 | 12.970 | 12.7768 |
4 | 0.9478 | 65 | 0.0953 | 14.635 | 12.8275 |
5 | 0.9904 | 65 | 0.0953 | 15.322 | 12.8543 |
6 | 0.9252 | 65 | 0.0953 | 14.267 | 12.8087 |
平均值：12.8245
RSD（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值）: 0.002%
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