寧波洛尚智能科技有限公司
寧波洛尚智能科技有限公司
暫無信息 |
閱讀：22發(fā)布時間：2025-8-6
一.實驗名稱:細(xì)胞的復(fù)蘇
二.實驗?zāi)康?將凍存的細(xì)胞恢復(fù)活性
三.實驗原理:在低于-70C的超低溫條件下,有機體細(xì)胞內(nèi)部的生化反應(yīng)其緩慢,甚至終止。所謂冷凍保存,就是將體外培養(yǎng)物或生物活性材料懸浮在加有或不加冷凍保護劑的溶液中,以一定的冷凍速率降至零下某度(一般是低于-70°c的超低溫條件),并在此溫度下對其長期保存的過程。而復(fù)蘇就是將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使細(xì)胞存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對細(xì)造成損害。
四.實驗步驟
1.實驗前準(zhǔn)備
1).將珠浴器（DHB-200）預(yù)熱至37℃,將培養(yǎng)液預(yù)熱后分裝到培養(yǎng)皿中
2）.離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等
2.取出凍存管
1）.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號.
2）.從液氫罐中取出細(xì)胞盒,取出所需的細(xì)胞,同時核對管外的編號
3.迅速解凍
1）.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動的液體迅速融化
2）.約1-2min后凍存管內(nèi)液體溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內(nèi)。
4.平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min離心3min
五.制備細(xì)胞懸液
1）.吸棄上清液
2）.向離心管內(nèi)加入10m培養(yǎng)液,吹打制成細(xì)胞懸液
六.細(xì)胞計數(shù):細(xì)胞濃度以5x105/ml為宜。
七.培養(yǎng)細(xì)胞
將復(fù)合細(xì)胞計數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶養(yǎng)瓶放入37℃5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)24小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時間由細(xì)胞情況而定。
初學(xué)者易犯錯誤：
1.珠浴器（DHB-200）未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃
2.珠浴器（DHB-200）內(nèi)凍存管太多,導(dǎo)致傳熱不佳,使融化時間延長
3.離心前忘記平衡,導(dǎo)致離心機損壞和細(xì)胞丟失。
4.一次復(fù)蘇細(xì)胞過多，忘記更換吸頭和吸管,導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。
版本2
一.細(xì)胞復(fù)蘇的原則
在實際操作中,凍存細(xì)胞要進(jìn)行復(fù)蘇,再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞
二.細(xì)胞復(fù)蘇的主要操作步驟
(1)佩戴眼鏡和手套,從液氮罐中取出安瓿或冷凍管
(2)迅速放入38℃水浴中,并不時搖動,在1分鐘內(nèi)使其融化,然后在無菌下取出細(xì)胞
(3)在1000r/min速度下離心5~10分鐘,棄去上層液,加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中,接種濃度1×10°幾L,置37℃溫箱靜置培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),觀察生長情況。若細(xì)胞密度較高,及時傳代。或無需離心直接將細(xì)胞加入瓶中,并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng)12~24小時后,充去上清,換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
三.注意事項
在細(xì)胞復(fù)蘇操作時,應(yīng)注意融化凍存細(xì)胞速度要快,可不時搖動安瓿或冷凍,使之盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。這樣復(fù)蘇的凍存細(xì)胞存活率高,生長及形態(tài)良好。然而,由于凍存的細(xì)胞還受其他因素的影響,有時也會有部分細(xì)胞死亡。此時,可將不貼壁、飄浮在培養(yǎng)液上(已死亡)的細(xì)胞輕輕倒掉,再補以適量的新培養(yǎng)液,也會獲得較為滿意的結(jié)果。
儀表網(wǎng) 設(shè)計制作，未經(jīng)允許翻錄必究 .? ? ?
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼