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蛋白Pull down技術(shù)將目標(biāo)蛋白進(jìn)行體外原核表達(dá)，使標(biāo)簽蛋白（Halo、GST、His等）與目標(biāo)蛋白融合表達(dá)，可以不受抗體、物種限制僅借助標(biāo)簽的親和介質(zhì)將目標(biāo)蛋白純化出來，目標(biāo)蛋白在純化過程中可以將與其能夠發(fā)生作用的蛋白“下拉”下來，進(jìn)而利用蛋膠、Western Blot或者質(zhì)譜鑒定拉下來的蛋白質(zhì)，這些蛋白即與目標(biāo)蛋白相互作用的蛋白。蛋白Pull down實(shí)驗(yàn)還可以通過外源同時(shí)表達(dá)目標(biāo)蛋白和待測蛋白，利用Pull down點(diǎn)對點(diǎn)的確定它們是否發(fā)生直接的相互作用，也可以僅表達(dá)蛋白質(zhì)的結(jié)合區(qū)域進(jìn)行蛋白Pull down，確定兩個(gè)蛋白結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。

本公司主要提供Halo/GST-tag pull down：Halo-tag pull down是使用體外真核表達(dá)系統(tǒng)來表達(dá)目的蛋白，表達(dá)的目的蛋白攜帶Halo標(biāo)簽；GST-tag pull down是使用大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白，表達(dá)的目的蛋白攜帶GST標(biāo)簽，也可以利用其它標(biāo)簽蛋白進(jìn)行pull down實(shí)驗(yàn)。

Halo/FLAG-tag pull down技術(shù)優(yōu)勢：

真核表達(dá)系統(tǒng)，蛋白更接近體內(nèi)結(jié)構(gòu)

沒有細(xì)胞內(nèi)干擾因素的限制，表達(dá)成功率高

蛋白表達(dá)載體構(gòu)建成功后，不需要轉(zhuǎn)化和鑒定，可直接表達(dá)目的蛋白，節(jié)省時(shí)間

步驟	內(nèi)容	交付內(nèi)容	周期
載體構(gòu)建	客戶提供目的蛋白對應(yīng)的CDS的序列或質(zhì)粒，克隆至合適的表達(dá)載體，質(zhì)粒測序，質(zhì)粒制備。	測序結(jié)果	1-2周
無細(xì)胞表達(dá)+純化	用小麥芽胚蛋白表達(dá)體系進(jìn)行蛋白表達(dá)，蛋白表達(dá)評估 (Western Blot) 。	表達(dá)評估報(bào)告	1周
Pull Down	細(xì)胞裂解，目的蛋白和總蛋白孵育，洗脫與目的蛋白結(jié)合的蛋白。	銀染結(jié)果	1周
質(zhì)譜檢測	將洗脫的蛋白進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。	質(zhì)譜結(jié)果	2周

客戶提供材料

交付結(jié)果

新鮮樣本（組織或者細(xì)胞）：細(xì)胞數(shù)量>2.7ⅹ10⁷；

組織樣本>3g

載體測序結(jié)果

實(shí)驗(yàn)過程圖

質(zhì)譜結(jié)果

蛋白Pull Down 技術(shù)流程

蛋白Pull Down結(jié)果示例

結(jié)果.png GO結(jié)果.png KEGG結(jié)果.png

蛋白Pull Down應(yīng)用案例

2023年12月，北京林業(yè)大學(xué)和藍(lán)景科信合作，在植物學(xué)主流學(xué)術(shù)期刊Plant Stress（IF=5.0）上，發(fā)表了題為“Populus euphratica CPK21 interacts with heavy metal stress-associated proteins to mediate Cd tolerance in Arabidopsis”的研究成果。該研究借助HaloTag pull-down技術(shù)鑒定了胡楊CPK21的互作蛋白，為揭示胡楊CPK21調(diào)控植物Cd耐受的分子機(jī)制研究提供了技術(shù)支撐。