成都滲源科技有限公司
成都滲源科技有限公司
暫無信息 |
閱讀：6發(fā)布時間：2026-2-28
目前疫情的防控工作取得了階段性的成效，基于實時熒光定量PCR的核酸檢測技術在病毒快速鑒定及確診中發(fā)揮了重要作用。
什么是實時熒光定量PCR?
實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)技術，簡稱qPCR,是在PCR反應體系中加入熒光物質(zhì)(熒光染料或熒光標記的特異性探針)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
與普通PCR相比，實時熒光定量PCR技術是一次由定性技術向定量技術的飛躍。運用該項技術，可以對DNA、RNA樣品進行相對定量、定量和定性分析。
實驗流程：
在實時熒光定量PCR實驗中，可以分為樣本采集，RNA提取，RNA質(zhì)量鑒定，反轉錄及數(shù)據(jù)分析幾個步驟，在進行引物、模板的稀釋，試劑的配制和補足反應體系時都會用到水，水質(zhì)量的好壞直接影響最終數(shù)據(jù)分析的結果。
水中的顆粒物，離子含量，有機物及細菌微生物等雜質(zhì)對實驗都會帶來影響，關注的因素有以下兩個方面：
1. DNA酶和RNA酶
DNA酶和RNA酶能夠特異性地降解DNA和RNA。在進行實時熒光定量PCR時，去除這兩種酶從而保證提取的RNA和DNA樣本的完整性十分關鍵。尤其在提取RNA的時候，RNA極易被降解。這是因為RNase非常穩(wěn)定，且無處不在，用常規(guī)的高溫高壓蒸汽方法和蛋白酶抑制劑不能使所有的RNase失活。如果樣本中的核酸被降解，會影響檢測結果的準確性，甚至造成假陰性檢測結果。
因此，實時熒光定量PCR實驗用超純水必須有效降低DNA酶和RNA酶的含量，減少對實驗的影響。
2. 鎂離子
實時熒光定量PCR實驗需要根據(jù)不同的引物對和模板確定的鎂離子濃度。
Mg2+濃度過低，會影響DNA聚合酶的活性，導致產(chǎn)量降低，影響實時定量的敏感性;
Mg2+濃度過高，會增加引物二聚體的形成，這會影響特異性。
因此，實時熒光定量PCR實驗用超純水必須控制Mg2+濃度，避免背景因素帶來的不確定性。
綜上，實時熒光定量PCR實驗推薦使用超純水，水質(zhì)要求如下圖所示：
儀表網(wǎng) 設計制作，未經(jīng)允許翻錄必究 .? ? ?
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼